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lianyi1989

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 949.4
帖子: 67
在线: 23.4小时
虫号: 841536

[交流] 【求助/交流】荧光定量pcr出现直线扩增曲线，求指导

最近做的一些列样品中有的样品出现来直线扩怎曲线的现象，不知什么原因，用的SYBR Green的方法，ABI7500仪器。因为其他的样品都没这种问题，所以一开始怀疑cDNA有问题，重新合成了，但是在做仍有这种问题，真是不知道什么原因，求各位同学们给些指导，谢谢大家啦

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1楼 2010-12-30 22:12:42

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wmjqy

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 232.6
帖子: 34
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虫号: 1219002

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

我也是用7500做的。从你的图像看，你这个根本cDNA模版就没有开链。这个可以有很多因素造成：1、退火温度和退火时间不恰当；2、可能根本就没有cDNA模版。如果是没有模版的话，那可能是你逆转录的问题了。在逆转录操作过程中RNA已经降解，或者DNA污染或者蛋白污染等情况都有可能导致逆转录失败，从而没有cDNA的合成。你逆转录之前有没有测量A260/A280，A230/A280比值是多少?如果以上都排除了，那就是你的源头引物有问题了。得重新设计引物了。这是我用7500做的一个扩增曲线图。仅供参考
[

[ Last edited by wmjqy on 2012-5-23 at 23:10 ]