应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量pcr出现直线扩增曲线，求指导
61/1返回列表
查看: 4306  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lianyi1989

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量pcr出现直线扩增曲线，求指导

最近做的一些列样品中有的样品出现来直线扩怎曲线的现象，不知什么原因，用的SYBR Green的方法，ABI7500仪器。因为其他的样品都没这种问题，所以一开始怀疑cDNA有问题，重新合成了，但是在做仍有这种问题，真是不知道什么原因，求各位同学们给些指导，谢谢大家啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-30 22:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
lianyi1989(金币+1): 2011-01-01 12:59:47
重新设计引物，可能出现了非特异或者竞争性的东西
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-30 22:24:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lianyi1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 22:24:42:
重新设计引物，可能出现了非特异或者竞争性的东西

谢谢，但是我其他处理的样品没有这种问题啊，并且我用过两个引物做都是这种结果，所以我觉得是引物原因的可能性是不是比较小些？
赞一下 回复此楼
3楼2011-01-01 13:01:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by lianyi1989 at 2011-01-01 13:01:30:


谢谢，但是我其他处理的样品没有这种问题啊，并且我用过两个引物做都是这种结果，所以我觉得是引物原因的可能性是不是比较小些？

我最近在用qPCR检测RNAi的效果
发现如果引物没设计好，然后模板量很低的话，扩出来的曲线就是很奇怪的

还真不是单一因素引起的
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-01 13:03:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmjqy

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是用7500做的。从你的图像看，你这个根本cDNA模版就没有开链。这个可以有很多因素造成：1、退火温度和退火时间不恰当；2、可能根本就没有cDNA模版。如果是没有模版的话，那可能是你逆转录的问题了。在逆转录操作过程中RNA已经降解，或者DNA污染或者蛋白污染等情况都有可能导致逆转录失败，从而没有cDNA的合成。你逆转录之前有没有测量A260/A280，A230/A280比值是多少?如果以上都排除了，那就是你的源头 引物有问题了。得重新设计引物了。这是我用7500做的一个扩增曲线图。仅供参考
[

[ Last edited by wmjqy on 2012-5-23 at 23:10 ]
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-23 22:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主你的这个问题解决了吗？我最近做Q-PCR也遇到了类似的问题，扩增曲线也近似直线，所以过来请教下，O(∩_∩)O谢谢
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-10-24 14:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lianyi1989 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭