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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】实时荧光定量pcr的问题
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】实时荧光定量pcr的问题 已有4人参与

请各位高手帮帮忙啊
我是做丙硫咪唑对家蚕微孢子虫β微管蛋白基因抑制作用的，我有对照，添毒微孢子虫的和添毒微孢子虫后又加丙硫咪唑处理的这三种不同的处理方式，取三种不同组织，六个不同时段，以β-actin为内参基因，来研究待测基因β微管蛋白基因的基因表达差异，每个pcr管做3次重复，那么我需要设计多少种组合  在96孔荧光定量pcr仪种应该怎样排列呢  谢谢
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三人行必有我师
1楼 2010-08-20 16:42:44
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hulqi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这么多样，你一个板子肯定做不完的
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2楼2010-08-21 16:02:52
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hulqi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):辛苦了， 2010-08-24 09:02:57
抑制剂是单独使用吧？有没有组合的情况？没有的话你可以按时段做，做6次，每次有9个样，每个样对应一个内参，中间放标曲。
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3楼2010-08-21 16:13:39
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pidou

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hulqi at 2010-08-21 16:13:39:
抑制剂是单独使用吧？有没有组合的情况？没有的话你可以按时段做，做6次，每次有9个样，每个样对应一个内参，中间放标曲。


支持该种做法
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4楼2010-08-21 19:03:05
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whoisthis

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):最好能够给楼主描述的稍微详细一些，顺便提醒TA成本~ 2010-08-24 09:05:52
建议用探针，在一个管中做多重pcr，不用搞重复。
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5楼2010-08-21 20:09:21
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chendarid0

银虫 (初入文坛)
谢谢大家的指点
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三人行必有我师
6楼2010-08-22 14:08:09
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chendarid0

银虫 (初入文坛)
★
silicare(金币+1):1楼鼓励发言，本楼鼓励讨论 2010-08-24 09:08:20
引用回帖:
Originally posted by hulqi at 2010-08-21 16:13:39:
抑制剂是单独使用吧？有没有组合的情况？没有的话你可以按时段做，做6次，每次有9个样，每个样对应一个内参，中间放标曲。


谢谢这位高手的解答，下面是我的思路，请问可行不
我总共要做3*3*6*2*3个管子  第一个3是三种不同处理方式对照，加微孢子虫和加微孢子虫后又加丙硫咪唑药物处理的  第二个3是3个不同组织，6是6个不同时段，2是目的基因β微管蛋白基因引物和β-actin内参基因引物两种引物，最后一个3是每管重复3次
如果我按照一个组织一个组织来做，比如做中肠时分对照、加微孢子虫/对照、微孢子虫又加丙硫咪唑药物处理2个板来做，那我每板有2*6*2*3个管子，第一个2是两种处理方式，6是6个时段，2是β微管蛋白基因引物和β-actin内参基因引物两种引物，3是每管3次重复共72孔，正好可以在96孔上做。其他2个组织类推，那我也要做6次，这样可以吗
谢谢 请高手解答
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三人行必有我师
7楼2010-08-23 21:09:46
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

谢谢这位高手回答 还有问题请教

引用回帖:
Originally posted by hulqi at 2010-08-21 16:13:39:
抑制剂是单独使用吧？有没有组合的情况？没有的话你可以按时段做，做6次，每次有9个样，每个样对应一个内参，中间放标曲。


请问你这里面A-I样品是待测目的基因的，下面6-8行是上面样品一一对应的内参基因。J列对照是阴性对照，无模板的，其下面6-8行是一一对应阴性对照相应的内参基因，是吗？而且我可以不用分时段，分组织，想做几个就做几个 ，只要按照你这目的基因对应内参基因的原则就可以，是吗？还有我是用2-△△ct法来测的，不用标准曲线，那可以A4-j4空白，是吗？
谢谢这位高手指点，请回答好吗？
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三人行必有我师
8楼2010-11-03 15:41:52
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