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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量PCR标准品制备及拷贝数计算
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lt7912

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR标准品制备及拷贝数计算

听一个老师说可以用标准品片段的大小通过标准品DNA的ng数再除以一个什么系数算出，求教具体的公式！

[ Last edited by lt7912 on 2010-8-29 at 16:45 ]
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1楼 2010-08-28 16:47:42
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lt7912

金虫 (小有名气)

我在网上找到了！

自己在网上找到了..............
http://www.bioask.cn/html/541.html
希望对以后做定量的朋友有用，这个网站不错！有好多关于定量PCR的东西可以看看！
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2楼2010-08-29 16:45:03
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silicare

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优秀版主
★
lt7912(金币+1):谢谢参与
标准品就是已知浓度的模板梯度稀释，然后做成标准曲线

不同浓度的模板当然就会对应一个不同的ct值

根据你的位置浓度的模板的CT值就可以在标准曲线中查到对应的浓度了

这个和测蛋白浓度是一个意思
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3楼2010-08-29 18:51:49
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lt7912

金虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-08-30 11:20:50
呵呵，楼上的说的对。但是你需要知道模版的拷贝数啊，不能直接拿浓度来做的！直接提取的话是全基因组的DNA浓度，算起来很麻烦（除了核DNA还有其他的DNA）,而且大不好算。你不能保证很好的模版和拷贝数。所以有两种方法做，一种是把目的片段连接到质粒里，测定浓度后计算拷贝数，一种是P一条较模版长一些的条带作为标准品模版，计算拷贝数。我上面找到的公式就是为第二种方法计算拷贝数的。
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4楼2010-08-30 10:47:39
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