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lt7912

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR标准品制备及拷贝数计算

听一个老师说可以用标准品片段的大小通过标准品DNA的ng数再除以一个什么系数算出,求教具体的公式!

[ Last edited by lt7912 on 2010-8-29 at 16:45 ]
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lt7912

金虫 (小有名气)

我在网上找到了!

自己在网上找到了..............
http://www.bioask.cn/html/541.html
希望对以后做定量的朋友有用,这个网站不错!有好多关于定量PCR的东西可以看看!
2楼2010-08-29 16:45:03
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silicare

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lt7912(金币+1):谢谢参与
标准品就是已知浓度的模板梯度稀释,然后做成标准曲线

不同浓度的模板当然就会对应一个不同的ct值

根据你的位置浓度的模板的CT值就可以在标准曲线中查到对应的浓度了

这个和测蛋白浓度是一个意思
3楼2010-08-29 18:51:49
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lt7912

金虫 (小有名气)


silicare(金币+1):谢谢参与 2010-08-30 11:20:50
呵呵,楼上的说的对。但是你需要知道模版的拷贝数啊,不能直接拿浓度来做的!直接提取的话是全基因组的DNA浓度,算起来很麻烦(除了核DNA还有其他的DNA),而且大不好算。你不能保证很好的模版和拷贝数。所以有两种方法做,一种是把目的片段连接到质粒里,测定浓度后计算拷贝数,一种是P一条较模版长一些的条带作为标准品模版,计算拷贝数。我上面找到的公式就是为第二种方法计算拷贝数的。
4楼2010-08-30 10:47:39
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