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【求助/交流】实时荧光定量PCR的扩增效率低该如何改进?
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dongfangzz
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[交流]
【求助/交流】实时荧光定量PCR的扩增效率低该如何改进?
已有5人参与
实时荧光定量PCR(染料法)的指数扩增期曲线上升较平缓,斜率较低。分析应该是扩增效率低。做了两组标本,3个基因。Ct值最早的出现在15个循环,晚的在31个循环。
请问
斜率低的原因是什么呀?
该如何改进呢?
[
Last edited by dongfangzz on 2010-10-10 at 23:13
]
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1楼
2010-10-09 18:59:45
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现在的讨论怎么不激烈呀
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scelab(金币+2):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-12 00:00:56
可能的原因之一是模板的拷贝数低,也就是你反转录效率不高,可以尝试更高质量RNA的提取及反转录实验。
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3楼
2010-10-11 20:50:39
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scelab(金币+1):谢谢交流!:tiger06: 2010-10-12 00:01:02
重新设计引物,优化反应体系和条件,买好的试剂~
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2010-10-11 23:24:20
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼
:
Originally posted by
王会征
at 2010-10-11 20:50:39
可能的原因之一是模板的拷贝数低,也就是你反转录效率不高,可以尝试更高质量RNA的提取及反转录实验。
引物效率106%是怎么回事?
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黎明前最黑暗
6楼
2014-05-24 11:02:13
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