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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【分享】看看我做的这个新型PCR增强剂效果怎么样
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bigboy123

铜虫 (小有名气)

[交流] 【分享】看看我做的这个新型PCR增强剂效果怎么样已有16人参与

这个是我偶然发现的一种物质，可以有效提高PCR扩增的产量，翻变所有文献都没有该物质的介绍，因此对国产和进口的Taq酶还比较有效。产品质量可以稳定了，正准备请人公开测试。
挂个产品介绍和刚收到的一个电泳图谱（朋友帮忙做的）在里面，愿意帮我做测试并给我发图片的朋友可以联系我，bsyan_cn@sina.com.cn,发短信也可以。


这个图是朋友帮忙做的电泳图，从左到右1-4是加入增强剂的，5-6是未加的。其他都是无关条带。
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供应PCR增量剂
1楼2010-09-09 11:02:12
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
silicare(金币+3):效果很好啊，分享一下吧 2010-09-19 12:25:58


      费了半天劲，终于传上来了。不过这个有点夸张，一般人做不到这个程度。我做这个对比试验时，用的是国产最普通最便宜的Taq酶，现在大家用的Taq酶都比我用的质量和价格都高了很多倍，所以不同质量的酶之间应该存在差异。
     多次试验的总体感觉，PCR增强剂不会改变强样本的Ct值和荧光信号最大强度，弱样本的Ct值也不会改变，但能提高信号强度。原先信号太低的样本就会超过阈值线而被检出了，这样可以提高试剂的灵敏度。
    另外强调一下，荧光PCR反应的好坏最终取决于所设计的引物和探针的质量，增强剂只是在你实在没办法再改进时，帮你通过提高PCR产物产量，再前进一步而已。毕竟尝试改变引物和探针可能对PCR效率的提高更加明显，只是需要些运气而已。
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供应PCR增量剂
7楼2010-09-09 19:04:11
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
silicare:吊大家胃口？ 你的出发点…… 2010-09-28 11:53:47
做基因芯片的测试结果出来了，可以大幅提高检测的灵敏度。哈哈，这个可说是他们的福音呀。

欢迎大家对该产品进行后续的开发，比如做个什么酶保护剂什么的。该产品的一个特点就是对温度变化耐受。
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供应PCR增量剂
18楼2010-09-28 11:17:12
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
用来做荧光PCR的话效果也很好，可以把低拷贝样本的荧光信号值拉到跟高拷贝样本的一样高，图片我就不发了，有需要的话可以给你发邮件。
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供应PCR增量剂
2楼2010-09-09 11:04:13
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love_st

金虫 (著名写手)
★
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Originally posted by bigboy123 at 2010-09-09 11:04:13:
用来做荧光PCR的话效果也很好，可以把低拷贝样本的荧光信号值拉到跟高拷贝样本的一样高，图片我就不发了，有需要的话可以给你发邮件。

发一下你的荧光PCR的图谱给我下，love_st@163.com，谢谢
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3楼2010-09-09 12:09:38
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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Originally posted by bigboy123 at 2010-09-09 11:04:13:
用来做荧光PCR的话效果也很好，可以把低拷贝样本的荧光信号值拉到跟高拷贝样本的一样高，图片我就不发了，有需要的话可以给你发邮件。

没明白楼主的意思，这样定量还准吗？对高拷贝样本的促进效果能和低的效率一致吗？
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4楼2010-09-09 12:22:34
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议克隆测序，看看会不会突变
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5楼2010-09-09 12:32:33
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+7):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-09 23:02:24
实时荧光PCR定量依据是模板刚开始出现扩增时的循环数（Ct值）来进行定量，不是根据PCR终产物来定量的。

      一般Taq酶在PCR循环后期聚合活性和特异性都会下降，从而导致有效的扩增效率下降，因此一般厂家都会添加一些乱七八糟的增强剂来延缓酶的衰竭，我这个由于是非文献的东西，其工作机理也从没有被报告过，对大家的Taq酶才适用。

      在荧光PCR扩增中，这个增强剂可以提高低拷贝样本的荧光信号强度，可以与强样本的扩增信号强度相当，对Ct值没有改变，因此不会改变定量的准确性。
因此我们才推测对低拷贝样本的扩增更有效些。
      电泳法检测的结果比较粗糙，主要是朋友随便拿个样本就给测了，还没有来得及做梯度的PCR扩增效果对比，过几天结果就会上传吧。
      目前做过的试验有37度热稳定性，及反复冻融试验，只要试剂避光和避免反复开盖，基本比较稳定。如果还有什么需要测试的地方，欢迎提点建议，以及帮忙测试，我们将会万分感谢。
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供应PCR增量剂
6楼2010-09-09 18:42:25
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
突变估计不会太大，假如有单个碱基突变的话，探针信号就会下降甚至消失了。
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供应PCR增量剂
8楼2010-09-09 19:06:15
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
酶生产用户的测试结果，做DNA模板的PCR扩增时电泳条带增宽比较明显，一步法做RT-PCR时和部分国产逆转录酶有冲突，主要是部分酶中所含的甜菜碱生成PCR抑制物。
单独比较结果显示本品要大大优于甜菜碱。
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供应PCR增量剂
9楼2010-09-12 10:12:29
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
这是一个比较漂亮的对比图片，分别是加入不同增强剂后的PCR电泳结果。比我自己做的还要好看些。
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供应PCR增量剂
10楼2010-09-19 11:14:56
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