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bigboy123铜虫 (小有名气)
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【分享】看看我做的这个新型PCR增强剂效果怎么样 已有16人参与
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这个是我偶然发现的一种物质，可以有效提高PCR扩增的产量，翻变所有文献都没有该物质的介绍，因此对国产和进口的Taq酶还比较有效。产品质量可以稳定了，正准备请人公开测试。 挂个产品介绍和刚收到的一个电泳图谱（朋友帮忙做的）在里面，愿意帮我做测试并给我发图片的朋友可以联系我，bsyan_cn@sina.com.cn,发短信也可以。  这个图是朋友帮忙做的电泳图，从左到右1-4是加入增强剂的，5-6是未加的。其他都是无关条带。 |
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silicare(金币+3):效果很好啊，分享一下吧 2010-09-19 12:25:58
silicare(金币+3):效果很好啊，分享一下吧 2010-09-19 12:25:58
 费了半天劲，终于传上来了。不过这个有点夸张，一般人做不到这个程度。我做这个对比试验时，用的是国产最普通最便宜的Taq酶，现在大家用的Taq酶都比我用的质量和价格都高了很多倍，所以不同质量的酶之间应该存在差异。 多次试验的总体感觉，PCR增强剂不会改变强样本的Ct值和荧光信号最大强度，弱样本的Ct值也不会改变，但能提高信号强度。原先信号太低的样本就会超过阈值线而被检出了，这样可以提高试剂的灵敏度。 另外强调一下，荧光PCR反应的好坏最终取决于所设计的引物和探针的质量，增强剂只是在你实在没办法再改进时，帮你通过提高PCR产物产量，再前进一步而已。毕竟尝试改变引物和探针可能对PCR效率的提高更加明显，只是需要些运气而已。 |
7楼2010-09-09 19:04:11
bigboy123
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5楼2010-09-09 12:32:33
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scelab(金币+7):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-09 23:02:24
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实时荧光PCR定量依据是模板刚开始出现扩增时的循环数（Ct值）来进行定量，不是根据PCR终产物来定量的。 一般Taq酶在PCR循环后期聚合活性和特异性都会下降，从而导致有效的扩增效率下降，因此一般厂家都会添加一些乱七八糟的增强剂来延缓酶的衰竭，我这个由于是非文献的东西，其工作机理也从没有被报告过，对大家的Taq酶才适用。 在荧光PCR扩增中，这个增强剂可以提高低拷贝样本的荧光信号强度，可以与强样本的扩增信号强度相当，对Ct值没有改变，因此不会改变定量的准确性。 因此我们才推测对低拷贝样本的扩增更有效些。 电泳法检测的结果比较粗糙，主要是朋友随便拿个样本就给测了，还没有来得及做梯度的PCR扩增效果对比，过几天结果就会上传吧。 目前做过的试验有37度热稳定性，及反复冻融试验，只要试剂避光和避免反复开盖，基本比较稳定。如果还有什么需要测试的地方，欢迎提点建议，以及帮忙测试，我们将会万分感谢。 |
6楼2010-09-09 18:42:25
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