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ann花开花落

铜虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量扩增效率低怎么办

最近在做荧光定量标准曲线,以人基因组DNA为标准品,发现扩增效率只有70%多,后来优化酶、探针,扩增效率还是低,换外控引物后有97%,但是换我们所在的外显子上的引物后扩增效率还是80%多,请问到底是标准品还是引物的问题导致扩增效率低呢?
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助! 2011-12-13 18:49:59
应该是引物问题,如果是标准品问题,其实可以用PCR产物回收纯化后做PCR,如果这还有问题一般都是引物或者体系问题

感觉体系,例如酶是哪个公司的,反应温度时间等,如果是DNA注意多变性一会,另外产物多大?
2楼2011-12-13 13:45:52
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ann花开花落(金币+3): 我们得出的结论也是模板里有抑制剂 2011-12-15 14:26:13
也有可能是模板里面还有抑制PCR的东西,试试把模板稀释10倍和100倍结果如何吧。

[ Last edited by 西瓜 on 2011-12-14 at 16:14 ]
3楼2011-12-13 18:50:41
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张晓洁

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我的扩增效率一直高于105 不知道是不是引物设计出了问题
每一发奋努力的背后必有加倍的赏赐
4楼2011-12-13 23:07:18
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