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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量扩增效率低怎么办
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ann花开花落

铜虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量扩增效率低怎么办

最近在做荧光定量标准曲线，以人基因组DNA为标准品，发现扩增效率只有70%多，后来优化酶、探针，扩增效率还是低，换外控引物后有97%，但是换我们所在的外显子上的引物后扩增效率还是80%多，请问到底是标准品还是引物的问题导致扩增效率低呢？
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1楼 2011-12-13 13:21:00
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张晓洁

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我的扩增效率一直高于105 不知道是不是引物设计出了问题
赞一下 回复此楼
每一发奋努力的背后必有加倍的赏赐
4楼2011-12-13 23:07:18
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助！ 2011-12-13 18:49:59
应该是引物问题，如果是标准品问题，其实可以用PCR产物回收纯化后做PCR，如果这还有问题一般都是引物或者体系问题

感觉体系，例如酶是哪个公司的，反应温度时间等，如果是DNA注意多变性一会，另外产物多大？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-12-13 13:45:52
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ann花开花落(金币+3): 我们得出的结论也是模板里有抑制剂 2011-12-15 14:26:13
也有可能是模板里面还有抑制PCR的东西，试试把模板稀释10倍和100倍结果如何吧。

[ Last edited by 西瓜 on 2011-12-14 at 16:14 ]
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3楼2011-12-13 18:50:41
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