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muchong5577金虫 (正式写手)
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[求助]
做RT-PCR的战友们，内标定量怎么做？
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| 从来没做过内标定量的荧光定量PCR，有战友做过这个没？内标定量有什么优点？具体怎么做？初次接触，望大家帮我解答这些疑问。告诉我这方面的文献资料也行。谢谢了！ |
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muchong5577
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【答案】应助回帖
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muchong5577(金币+5): 非常感谢！ 2011-08-10 09:42:41
lstt09nk(金币+5, BioEPI+1): 我也要做这个，感谢分享~~ 2011-08-11 13:06:15
muchong5577(金币+5): 非常感谢！ 2011-08-10 09:42:41
lstt09nk(金币+5, BioEPI+1): 我也要做这个，感谢分享~~ 2011-08-11 13:06:15
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1.内标定量？是指的内参吧？reference gene ？是这个吗？ 2.real-time 定量有三种：标准曲线法，双标准曲线法，DELTA DELTA CT法。（PS.没有楼主说的内标定量法） 标准曲线法：是精确定量，知道具体的表达数，一般应用于医院检测病毒携带数（乙肝病毒数）。 后面两者是相对定量，知道A和B之间的关系，比如：A是B的多少倍。用于处理组和非处理组之间的基因表达差异。 一般认为绝对定量可以不用内参，相对定量使用内参。 3.具体操作过程。个人感觉楼主初次接触，还是看些资料吧。 生物秀这个栏目还可以http://ask.bbioo.com/special/experiment/RealtimePCR.htm 推荐这本书《Real-time PCR》 网上有下，我就不上传了。 |
3楼2011-08-09 16:39:41
4楼2011-08-09 22:57:43
muchong5577
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5楼2011-08-10 09:47:30
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【答案】应助回帖
muchong5577(金币+2): 2011-08-12 08:44:43
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1.您的实验目的是什么？是绝对定量还是相对定量？ 2.我说的内参是基因，是引物。感觉您的内标是模板。我理解的对吗？ 3.如果您要做绝对定量，绝对定量中已知浓度的样本是什么都可以，只要干净，浓度准确即可。 |
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muchong55776楼2011-08-10 10:18:37
muchong5577
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9楼2011-08-10 14:04:13
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