24小时热门版块排行榜    

查看: 1712  |  回复: 4

xbburton

至尊木虫 (小有名气)

[交流] 谁做过双链RNA的RT-PCR 已有1人参与

最近在做双链RNA的RT-PCR,此双链RNA比较特殊,不含polyA序列,因此本人采用目标引物直接进行RT反应,可是最终扩出来的电泳带却呈弥散的一片,请帮我分析一下这是什么原因,我该如何继续实验?按道理讲,这时所扩增出来的这些弥散带都应该是两端含有我所设计引物的DNA片段,由于我设计的上下游引物分别加了起始和终止密码,那么我能否将这种弥散的DNA构建入表达载体中,让他们表达,从而希望获得各种不同氨基酸序列的多肽?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

mRNArt之后的cDNA做agarose gel的时候就是弥散的,正常;你应当再pcr一下rt之后的cDNA看看,这时应当有带
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-03-15 16:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbburton

至尊木虫 (小有名气)

sorry,可能我说的不太明确,我是用GSP引物做的RT,扩增完一链后,还是用这对引物进行PCR,结果出现的就是弥散带,我本意是想扩增特异性带的。最近在网上看invitrogren公司有可在高温(60度)条件下进行RT的试剂盒,不知用这种试剂盒行否?另外,有人认为我进行的是双链RNA的RT,因此在RT之前,应先将引物和RNA混合在80度变性10min,然后在室温放置10min。而我在公司的试剂盒说明中看到,对于具有复杂二级结构的RNA要先在65度(说超过65度RNA开始降解)5min,然后立即冰浴1-2min。不知道这两种方式对于双链RNA的RT来说哪种更好些?
3楼2009-03-17 14:14:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbburton

至尊木虫 (小有名气)

求助微生物方面的给鉴定一下

最近本人做材料抗菌实验室,发现在实验琼脂平板上除了长有正常的大肠杆菌菌落(用大肠杆菌做为实验菌)外,还长有类似梅花状的大片菌苔物(比大肠杆菌菌落大得多,且边缘不规则),没有取材鉴定是什么,菌苔颜色与大肠杆菌一样,想问问能是什么?
4楼2011-01-10 23:19:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbburton

至尊木虫 (小有名气)

补充

引用回帖:
Originally posted by xbburton at 2011-01-10 23:19:01:
最近本人做材料抗菌实验室,发现在实验琼脂平板上除了长有正常的大肠杆菌菌落(用大肠杆菌做为实验菌)外,还长有类似梅花状的大片菌苔物(比大肠杆菌菌落大得多,且边缘不规则),没有取材鉴定是什么,菌苔颜色与 ...

具体图片见附件,第一张为待鉴定之物,第二张是同时养的长出大肠杆菌菌落图
5楼2011-01-10 23:23:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xbburton 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +7 大米饭! 2026-03-15 7/350 2026-03-16 10:25 by 了了了了。。
[考研] 材料专硕306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:19 by Demonsssss
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-15 6/300 2026-03-16 08:00 by wang_dand
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +4 曦熙兮 2026-03-15 4/200 2026-03-15 18:01 by JourneyLucky
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:57 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分,求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院,化学方向,295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +4 ly3471z 2026-03-13 4/200 2026-03-13 13:00 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀! 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[硕博家园] 木虫好像不热闹了,是不是? +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
[考研] 294 英二数二物化 求调剂 +6 米饭团不好吃 2026-03-09 6/300 2026-03-09 23:55 by barlinike
信息提示
请填处理意见