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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 谁做过双链RNA的RT-PCR
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

[交流] 谁做过双链RNA的RT-PCR 已有1人参与

最近在做双链RNA的RT-PCR，此双链RNA比较特殊，不含polyA序列，因此本人采用目标引物直接进行RT反应，可是最终扩出来的电泳带却呈弥散的一片，请帮我分析一下这是什么原因，我该如何继续实验？按道理讲，这时所扩增出来的这些弥散带都应该是两端含有我所设计引物的DNA片段，由于我设计的上下游引物分别加了起始和终止密码，那么我能否将这种弥散的DNA构建入表达载体中，让他们表达，从而希望获得各种不同氨基酸序列的多肽？
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1楼 2009-03-15 07:00:54
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
mRNArt之后的cDNA做agarose gel的时候就是弥散的，正常；你应当再pcr一下rt之后的cDNA看看，这时应当有带
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会当凌绝顶，一览众山小
2楼2009-03-15 16:56:10
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)
sorry，可能我说的不太明确，我是用GSP引物做的RT，扩增完一链后，还是用这对引物进行PCR，结果出现的就是弥散带，我本意是想扩增特异性带的。最近在网上看invitrogren公司有可在高温（60度）条件下进行RT的试剂盒，不知用这种试剂盒行否？另外，有人认为我进行的是双链RNA的RT，因此在RT之前，应先将引物和RNA混合在80度变性10min，然后在室温放置10min。而我在公司的试剂盒说明中看到，对于具有复杂二级结构的RNA要先在65度（说超过65度RNA开始降解）5min，然后立即冰浴1-2min。不知道这两种方式对于双链RNA的RT来说哪种更好些？
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3楼2009-03-17 14:14:02
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

求助微生物方面的给鉴定一下

最近本人做材料抗菌实验室，发现在实验琼脂平板上除了长有正常的大肠杆菌菌落（用大肠杆菌做为实验菌）外，还长有类似梅花状的大片菌苔物（比大肠杆菌菌落大得多，且边缘不规则），没有取材鉴定是什么，菌苔颜色与大肠杆菌一样，想问问能是什么？
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4楼2011-01-10 23:19:01
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

补充

引用回帖:
Originally posted by xbburton at 2011-01-10 23:19:01:
最近本人做材料抗菌实验室，发现在实验琼脂平板上除了长有正常的大肠杆菌菌落（用大肠杆菌做为实验菌）外，还长有类似梅花状的大片菌苔物（比大肠杆菌菌落大得多，且边缘不规则），没有取材鉴定是什么，菌苔颜色与 ...

具体图片见附件，第一张为待鉴定之物，第二张是同时养的长出大肠杆菌菌落图
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5楼2011-01-10 23:23:44
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