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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 高手看看我提取的RNA可以进行RT-PCR吗
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adloves

新虫 (小有名气)

[求助] 高手看看我提取的RNA可以进行RT-PCR吗

最近提取的米曲霉RNA图，不知道可不可以做RT-PCR，求高人指教~~
我用的提取液是TaKaRa公司的RNAiso Plus，步骤按他们给的来做的， 稀释十倍点样。

米曲霉RNA提取图
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杜钰~
1楼 2012-05-05 21:25:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-06 19:12:24
降解十分严重，而且有很严重的蛋白质污染，这样逆转录的时候会有影响的。建议你把这次当做练手，就不要再往后做了，重新提取一次会比较好。下次操作吸取上清的时候一定要当心，不要吸到中间层，宁缺毋滥。降解比较严重的话建议你把使用的工具和耗材重新处理一下，避免RNase的污染。
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4楼2012-05-06 10:29:30
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

电泳图跑的不是很好，marker不清晰。
最好用于专门的电泳槽来跑RNA的电泳，配1-1.2%的胶，7-8V/cm电泳20-30min。每次更换新的电泳池液。
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伟大航线....
9楼2012-05-16 08:38:12
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普通回帖

涌动的泉

铜虫 (知名作家)
降解了，建议重新提过
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我们的过去，成就了如今的我们，无需悔恨
2楼2012-05-06 09:12:49
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adloves

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2012-05-06 09:12:49:
降解了，建议重新提过

恩  好吧~ 谢谢！
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杜钰~
3楼2012-05-06 10:08:45
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adloves

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2012-05-06 10:29:30:
降解十分严重，而且有很严重的蛋白质污染，这样逆转录的时候会有影响的。建议你把这次当做练手，就不要再往后做了，重新提取一次会比较好。下次操作吸取上清的时候一定要当心，不要吸到中间层，宁缺毋滥。降解比较 ...

恩  好的~   非常感谢啦！
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杜钰~
5楼2012-05-06 18:28:04
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adloves

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2012-05-06 10:29:30:
降解十分严重，而且有很严重的蛋白质污染，这样逆转录的时候会有影响的。建议你把这次当做练手，就不要再往后做了，重新提取一次会比较好。下次操作吸取上清的时候一定要当心，不要吸到中间层，宁缺毋滥。降解比较 ...

请问蛋白质污染应该注意些什么？是我研磨菌体不够充分吗？
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杜钰~
6楼2012-05-14 19:55:52
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白质污染主要是在加入氯仿离心后，吸取上清液的时候不小心吸到中间蛋白层。
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7楼2012-05-15 15:09:45
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
我想请教lz，RNA跑电泳是怎么弄的？我只会跑dna的,上次按DNA的条件跑RNA只得到一片模糊...lz有时间的话希望能告诉我一下...
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8楼2012-05-15 20:39:06
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adloves

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2012-05-15 15:09:45:
蛋白质污染主要是在加入氯仿离心后，吸取上清液的时候不小心吸到中间蛋白层。

上清其实大概有500μL，我只吸取了200μL，就是怕吸取了蛋白质了，我没有测纯度，但从电泳上面看的话，拖尾现象和条带模糊是属于蛋白质污染吗？还有那DNA污染可以从电泳图看的出来吗？
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杜钰~
10楼2012-05-16 10:18:53
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