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RNA纯度是否会影响RT-PCR的结果 已有4人参与
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| 各位虫友们，大家好，我提取的RNA,OD260/OD230都小于1可以用来做RT-PCR吗？影响大不大？ |
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朱多龙
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2楼2014-03-14 21:56:26
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3楼2014-03-15 01:20:09
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
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7楼2014-03-16 21:35:00
若溪
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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个人经验，260/230偏小的话，那就是提取的时候有机试剂有残留，提取时可以改进以下几点： 1.加氯仿抽提后取少一点上清，不要贪多。 2.加乙醇洗的时候，多晃几次，尽量让RNA沉淀整片悬浮起来（有时候确实浮不起来也没办法。） 3.弃乙醇的时候，用枪吸而不是倾倒，倒的话经常有液滴留在管壁上，倒不干净。第一次用蓝枪头吸，可以不完全吸干，免得吸到沉淀；然后短暂离心把残余酒精甩到管底，看准了用白枪头尽量吸干净。RNA量大，被白枪头弄掉一点也没关系。 4.溶解前晾干的时间可以长一点，5分钟也没关系的。标准的做法说是不能晾太久，等沉淀开始变透明就要加水溶解，但是我晾过10分钟的，后面RNA量也很大。可能量大，虽然有些溶解不了，最后浓度还是高。 |
8楼2014-03-17 09:12:37
9楼2014-03-23 20:51:31
匿名
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Thomas_HT
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10楼2014-08-20 14:49:33