| 查看: 1249 | 回复: 7 | ||
shenxing325铜虫 (小有名气)
|
[求助]
请问RT-PCR的过程会产生插入、缺失、突变等情况吗？
|
|
跟各位请教一下： 第一次提RNA做RT-PCR，反转录用的酶是promega的M-MLV，PCR用的酶是Takara的高保真酶PrimeSTAR，然后用rTag酶72度处理了30min加A尾，最后转进T载体里面。如图所示，是T载体转化后的菌落PCR图，感觉几个条带的位置都稍有差异，所以选取了3、4、5三个较浓、大小有代表性的菌落摇菌然后测序。过程大致就是这样。 结果让我奇怪的是这三个里面只有一个是我要的目的基因（5号），另外两个，其中一个（3号）发生了一些插入和缺失，有一大段和模板比对本来应该是在偏上游的位置，结果整段缺失，在偏下游的位置却出现了，并且多出了一个碱基，导致后面的序列都移码了；另外一个（4号）更加奇怪，几乎没有完整的orf除了上游引物部分对得上，后面的就完全不是我要的东西了，在NCBI上blast了一下，只有一个序列约有60%不到的碱基能比对得上，是属于比较近源的物种里面的。 我想弄明白的是，这两段奇怪序列是从哪里来的，是在反转录的时候发生的插入、缺失和突变吗？为何还能得到我本来想要的序列？有劳各位！  @Y7KQ[%20`D[Q$(49ILNSUW_副本.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有279人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
shenxing325
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 102.5
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 26.8小时
- 虫号: 1334715
- 注册: 2011-06-30
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2012-10-15 15:08:31
晨钟暮鼓w
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1135.6
- 红花: 3
- 帖子: 200
- 在线: 118.1小时
- 虫号: 2009472
- 注册: 2012-09-18
- 性别: GG
- 专业: 免疫遗传学
3楼2012-10-15 15:56:03
shenxing325
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 102.5
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 26.8小时
- 虫号: 1334715
- 注册: 2011-06-30
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2012-10-15 16:28:21
shenxing325
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 102.5
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 26.8小时
- 虫号: 1334715
- 注册: 2011-06-30
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2012-10-15 21:35:02
shenxing325
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 102.5
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 26.8小时
- 虫号: 1334715
- 注册: 2011-06-30
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2012-10-18 10:05:30
晨钟暮鼓w
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1135.6
- 红花: 3
- 帖子: 200
- 在线: 118.1小时
- 虫号: 2009472
- 注册: 2012-09-18
- 性别: GG
- 专业: 免疫遗传学
shenxing3257楼2012-10-18 10:10:21
shenxing325
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 102.5
- 红花: 2
- 帖子: 73
- 在线: 26.8小时
- 虫号: 1334715
- 注册: 2011-06-30
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2012-10-19 20:03:46
