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wygcsu

木虫 (小有名气)

[交流] RNA提取与反转录 已有9人参与

提取RNA反转录后成cDNA后，测cDNA的浓度比RNA浓度高了几十倍正常吗？理论上反转录效率100%不应该是前后浓度差不多吗？求大神指教。

[ Last edited by wygcsu on 2013-3-6 at 19:39 ]
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1楼 2013-03-06 19:36:10
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kiruwa

专家顾问 (职业作家)
怎么测的浓度
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请注意,照片不是我本人!!!请不要把此人和我的长相联系到一起去.
2楼2013-03-06 22:42:44
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wanghh_lzu

银虫 (初入文坛)
★
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我问过生物公司，他们的回复是： 反准录时会用到一些random 什么的primer，但这些一般都是过量的 所有反准录完了会有写残留，所以你测CDNA的浓度才会跟以前的不一样，希望对你有帮助。
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3楼2013-03-06 23:29:51
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
cDNA可以测浓度么？
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4楼2013-03-07 09:21:00
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sicauwht

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，cDNA是不能拿来测浓度的，因为你在反转录过程中加入的那些引物dNTP什么的都会影响的，你就只能以你反转录时加入的RNA量来计算，按理论100%转录率来算比较好，我之前也和你犯过同样的错，呵呵
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被时代和社会和谐的80后！
5楼2013-03-07 09:45:56
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
反转录出来的cDNA不能直接测浓度。原有的RNA模板及dNTP都会干扰测定。非要测的话必须把RNA消化掉，然后再纯化一下，去掉小分子量的dNTP. 要做定量的话一般就是定RNA的浓度，取同样质量的RNA进行反转录。
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6楼2013-03-07 10:32:44
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yixinyuan
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-07 10:32:44
反转录出来的cDNA不能直接测浓度。原有的RNA模板及dNTP都会干扰测定。非要测的话必须把RNA消化掉，然后再纯化一下，去掉小分子量的dNTP. 要做定量的话一般就是定RNA的浓度，取同样质量的RNA进行反转录。

7楼2013-03-07 21:29:24
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shucanwei

木虫 (正式写手)
反转录后有没有纯化呢？那些酶啊啥的都在的啊。
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
8楼2013-03-08 00:09:06
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小love肖

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
反转后的cDNA不用测浓度吧，我都是直接稀释一倍，然后直接PCR扩增了，没有问题啊，不知道怎么测浓度。
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9楼2013-03-08 09:03:10
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谁呀你是谁呀

金虫 (小有名气)
★
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测cDNA的浓度没什么意义 如果加了随机引物的话 有些反转录产物本身就不是从polyA开始的 多出来很正常
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等等等等
10楼2014-05-29 19:33:27
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