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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 反转录PCR对提出来的总RNA纯度有什么要求 DNA用dna酶去除，酶不影响后续实验吗？
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luyongchao

新虫 (小有名气)

[求助] 反转录PCR对提出来的总RNA纯度有什么要求 DNA用dna酶去除，酶不影响后续实验吗？

如题
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1楼 2013-01-02 20:58:19
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用DNAase处理过后，要用氯仿抽提的吧。
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2楼2013-01-02 21:36:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对做反转录的RNA的质量当然是纯度高的好。有DNA污染肯定不行，用DNase对后面实验当然有影响，酶处理后可以如2L说的酚氯仿抽提，也可以加热失活。
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3楼2013-01-03 06:58:59
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郜珊

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
luyongchao: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 你的字最多，呵呵 2013-01-09 11:07:53
因为RNA很容易降解，提取的时候要小心，戴口罩，手套，不要和同学说话（防止RNA降解），还要注意它的保存条件，防止降解。RNA纯度要高。加DNA酶是降解DNA，以防对RNA污染。酶可以在后续实验中加氯仿使其失活。
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4楼2013-01-03 12:05:03
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA酶处理后要把DNA酶再去掉，很麻烦，而且有可能会RNA降解，条件控制起来要求比较高，所以提的时候就尽量要把DNA去掉，一步到位最好
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5楼2013-01-03 19:00:37
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froess

新虫 (初入文坛)
RT后的总RNA要测一下OD值，在1.8~2.2之间为质量最好。要想获得较纯的RNA，最好在超净工作台提取，戴手套口罩，不知你用的是手工提取还是试剂盒提取，如果是手工，所有过程均应冰上进行。DNA在提取的过程中就应除去了，一般污染都是有机溶剂污染。如果要求质量还是选择试剂盒提取吧
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6楼2013-05-01 21:04:46
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