应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教RNA二级结构对反转录的影响
151/2返回列表12下一页
查看: 1922  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教RNA二级结构对反转录的影响 已有6人参与

最近反转感觉总是拿不到全长，请问二级结构会对反转有影响吗？我用AMV反转的。二级结构如图（不太会做，随便找了个软件预测的）：
[img][/img]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-06 16:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
等待高人指点！
回复此楼
2楼2010-09-06 21:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hacherboy

银虫 (小有名气)
友情帮顶~~
回复此楼
3楼2010-09-06 23:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
友情帮顶
回复此楼
小木虫之有关部门负责人
4楼2010-09-06 23:54:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-09-06 21:18:31:
等待高人指点！

谢谢~~
回复此楼
5楼2010-09-07 08:47:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hacherboy at 2010-09-06 23:27:20:
友情帮顶~~

谢谢~~
回复此楼
6楼2010-09-07 08:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
65℃足够打开这些二级结构了，拿不到全长还有几个可能：
1、rna降解
2、酶活不够
所以rna鉴定看看，然后酶是不是能换支新的，superscriptIII是我用的感觉比较好的逆转录酶
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-09-07 08:58:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-07 12:12:15
1、当然有影响！65-70℃变性打开二级结构后立刻冷却，防止退火。
2、全长的获得不一定是反转录的问题，也许是模板的问题——可以在提取总RNA时候多多注意，用好一些的试剂，我们用的是Trizol，或者Qiagen的盒子。其他所有试剂一律色谱级。
3、可以纯化，即得到mRNA后再做反转录！效率不是一个级别的。
4、AMV的活性很高，但是推荐你使用Rnase阴性的MMLV等。
5、目的gene多长？2k以内就好一点，再长了不好拿，过3.6kb的，分了几段拿出来的。
6……影响因素太多了！
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2010-09-07 09:39:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-07 08:58:32:
65℃足够打开这些二级结构了，拿不到全长还有几个可能：
1、rna降解
2、酶活不够
所以rna鉴定看看，然后酶是不是能换支新的，superscriptIII是我用的感觉比较好的逆转录酶

非常感谢！！
RNA降解不好说，不过比值都还好，1.9左右吧，酶是刚买的，应该问题不会很大，就是没有做预变性，不太清楚是不是这个原因，谢谢！
赞一下 回复此楼
9楼2010-09-07 12:30:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
lhwei1987:编辑内容 2010-09-07 12:37
引用回帖:
Originally posted by zhwenxing at 2010-09-07 09:39:49:
1、当然有影响！65-70℃变性打开二级结构后立刻冷却，防止退火。
2、全长的获得不一定是反转录的问题，也许是模板的问题——可以在提取总RNA时候多多注意，用好一些的试剂，我们用的是Trizol，或者Qiagen的盒子。 ...

我用CTAB法提的，RNA感觉还行吧，
[img][/img]
用的L3，下次先变性试试，非常感谢！！

[ Last edited by lhwei1987 on 2010-9-7 at 12:37 ]
赞一下 回复此楼
10楼2010-09-07 12:35:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lhwei1987 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 8/400 2026-03-16 13:42 by Dream007008
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 中科院材料273求调剂 +3 yzydy 2026-03-15 3/150 2026-03-15 21:15 by ms629
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 328，0703考生求调剂，一志愿为东北师范大学 +4 观素律 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:24 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:06 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭