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wygcsu

木虫 (小有名气)

[交流] RNA提取与反转录 已有9人参与

提取RNA反转录后成cDNA后,测cDNA的浓度比RNA浓度高了几十倍正常吗?理论上反转录效率100%不应该是前后浓度差不多吗?求大神指教。

[ Last edited by wygcsu on 2013-3-6 at 19:39 ]
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kiruwa

专家顾问 (职业作家)

怎么测的浓度
请注意,照片不是我本人!!!请不要把此人和我的长相联系到一起去.
2楼2013-03-06 22:42:44
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wanghh_lzu

银虫 (初入文坛)


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我问过生物公司,他们的回复是: 反准录时会用到一些random 什么的primer,但这些一般都是过量的 所有反准录完了会有写残留,所以你测CDNA的浓度才会跟以前的不一样,希望对你有帮助。
3楼2013-03-06 23:29:51
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
cDNA可以测浓度么?
4楼2013-03-07 09:21:00
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sicauwht

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主,cDNA是不能拿来测浓度的,因为你在反转录过程中加入的那些引物dNTP什么的都会影响的,你就只能以你反转录时加入的RNA量来计算,按理论100%转录率来算比较好,我之前也和你犯过同样的错,呵呵
被时代和社会和谐的80后!
5楼2013-03-07 09:45:56
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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反转录出来的cDNA不能直接测浓度。原有的RNA模板及dNTP都会干扰测定。非要测的话必须把RNA消化掉,然后再纯化一下,去掉小分子量的dNTP. 要做定量的话一般就是定RNA的浓度,取同样质量的RNA进行反转录。
6楼2013-03-07 10:32:44
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引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-07 10:32:44
反转录出来的cDNA不能直接测浓度。原有的RNA模板及dNTP都会干扰测定。非要测的话必须把RNA消化掉,然后再纯化一下,去掉小分子量的dNTP. 要做定量的话一般就是定RNA的浓度,取同样质量的RNA进行反转录。

7楼2013-03-07 21:29:24
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shucanwei

木虫 (正式写手)

反转录后有没有纯化呢?那些酶啊啥的都在的啊。
唯以一人治天下,不以天下奉一人。
8楼2013-03-08 00:09:06
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小love肖

铜虫 (初入文坛)


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反转后的cDNA不用测浓度吧,我都是直接稀释一倍,然后直接PCR扩增了,没有问题啊,不知道怎么测浓度。
9楼2013-03-08 09:03:10
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谁呀你是谁呀

金虫 (小有名气)


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测cDNA的浓度没什么意义 如果加了随机引物的话 有些反转录产物本身就不是从polyA开始的 多出来很正常
等等等等
10楼2014-05-29 19:33:27
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