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wygcsu

木虫 (小有名气)

[交流] RNA提取与反转录 已有9人参与

提取RNA反转录后成cDNA后,测cDNA的浓度比RNA浓度高了几十倍正常吗?理论上反转录效率100%不应该是前后浓度差不多吗?求大神指教。

[ Last edited by wygcsu on 2013-3-6 at 19:39 ]
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sicauwht

金虫 (正式写手)


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楼主,cDNA是不能拿来测浓度的,因为你在反转录过程中加入的那些引物dNTP什么的都会影响的,你就只能以你反转录时加入的RNA量来计算,按理论100%转录率来算比较好,我之前也和你犯过同样的错,呵呵
被时代和社会和谐的80后!
5楼2013-03-07 09:45:56
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wanghh_lzu

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我问过生物公司,他们的回复是: 反准录时会用到一些random 什么的primer,但这些一般都是过量的 所有反准录完了会有写残留,所以你测CDNA的浓度才会跟以前的不一样,希望对你有帮助。
3楼2013-03-06 23:29:51
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
cDNA可以测浓度么?
4楼2013-03-07 09:21:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
反转录出来的cDNA不能直接测浓度。原有的RNA模板及dNTP都会干扰测定。非要测的话必须把RNA消化掉,然后再纯化一下,去掉小分子量的dNTP. 要做定量的话一般就是定RNA的浓度,取同样质量的RNA进行反转录。
6楼2013-03-07 10:32:44
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