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821078607

银虫 (小有名气)

[求助] 测定提取总RNA浓度

大家好!请教一个问题,提取总RNA后,大家一般用DEPC水稀释多少倍测吸收,使用的仪器是紫外吸收吗?池子是白色两面透光的石英池吗?本来我提取的量很少,这样会不会损失太多。
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-12 15:42:29
我一般就是取10uL到60uL体系,测260和280;做转录的时候也用过5uL到100uL体系的,用于测量的我一般就不用了。稀释的话还要看你提的量的多少,一般池子的最小体积就是60uL。
2楼2012-10-11 22:12:18
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-12 15:42:19
821078607: 金币+3, 有帮助 2012-10-14 22:36:35
以前用岛津UV2401PC,石英比色皿,2微升样品加998微升水,测出结果在要求不是很严苛的情况下可以使用。现在用NANODROP,一微升样品就够了。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2012-10-12 04:39:19
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-12 15:42:05
821078607: 金币+2, 有帮助, 谢谢了 2012-10-14 22:36:46
用Nanodrop (Thermo) 测浓度,一次1ul即可;如果浓度很低(<10ng/ul),Nanodrop可能测不准,就用Qubit (invitrogen) 吧,也是一次1-2ul
4楼2012-10-12 08:30:14
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821078607

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-10-11 22:12:18
我一般就是取10uL到60uL体系,测260和280;做转录的时候也用过5uL到100uL体系的,用于测量的我一般就不用了。稀释的话还要看你提的量的多少,一般池子的最小体积就是60uL。

你用这么小的池子,那计算公式还是使用的OD260*40*稀释倍数吗?因为溶液浓度相同时,用不同池子测出的OD值会不一样的
5楼2012-10-12 09:17:32
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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821078607: 金币+10, 有帮助, 谢谢了 2012-10-14 22:36:02
引用回帖:
5楼: Originally posted by 821078607 at 2012-10-12 09:17:32
你用这么小的池子,那计算公式还是使用的OD260*40*稀释倍数吗?因为溶液浓度相同时,用不同池子测出的OD值会不一样的...

恩恩 我们这一直用这么小的池子,每次我测的时候都是用一个池子,尽量保持一致啊。
6楼2012-10-13 11:08:46
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821078607

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-10-13 11:08:46
恩恩 我们这一直用这么小的池子,每次我测的时候都是用一个池子,尽量保持一致啊。...

我想请教一下那你用什么公式计算的浓度啊,谢谢!
7楼2012-10-13 16:44:48
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 821078607 at 2012-10-13 16:44:48
我想请教一下那你用什么公式计算的浓度啊,谢谢!...

就是你之前写的这个公式大致计算一下RNA的浓度呢,
8楼2012-10-13 17:19:40
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