| 查看: 3998 | 回复: 6 | |||
| 本帖产生 1 个 翻译EPI ，点击这里进行查看 | |||
[交流]
几段中文翻译成英文 急求呀 拜托大家帮帮忙
|
|||
|
1 细胞培养及分组 MCM4201完全培养基常规培养HMCs，置于37℃、饱和湿度5%CO2的孵箱内贴壁传代培养，隔日换液,0.25%胰酶3~4天消化、传代。取6~9代对数生长期细胞，以每孔3~5×105个细胞接种6孔板中，培养细胞待其贴壁融合70%~80%后用无血清Opti-MEM培养基同步化24h，用于RNA转染及不同环境下继续培养。 2、siRNA合成与转染 根据GenBank数据库提供的人SAA全长基因(GenBank Acc. No. NM_001664.2)由美国Invitrogen公司设计合成RNAi的siRNA，SAA-siRNA：5′-GCUCAGACAAAUACUUCCAUGCUCG-3′；HMCs共分7组：（1）正常对照组（NG，含葡萄糖5.5mmol/L）；（2）高糖组（HG，含葡萄糖30mmol/L）；(3)等渗对照组（Man+ NG，含5.5mM葡萄糖及24.5mM的甘露醇）；(4) 波动糖组（FG, 含葡萄糖30mmol/L与含葡萄糖5.5mmol/L MCM培养基每4小时交替培养）；（5）高糖+脂质体对照组（HG+Lipo）；（6）高糖+阴性转染对照组（HG+negative-siRNA）；(7) 高糖+SAA-siRNA组（HG+SAA-siRNA）。以绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein, GFP）标记的siRNA做对照，转染48h后在荧光倒置显微镜下观察GFP的表达，计算转染效率。脂质体瞬时转染方法严格按照Lipofectamine?2000说明书进行。于0h、12h、24h、48h末收集各组细胞上清。 3 、总RNA提取及cDNA的合成 各组分别作用48h后按5×106～1×107个细胞加1ml TRIzol低温吹打，后续操作按Trizol说明书进行，最后用DEPC处理的超纯水溶解RNA，60℃孵育5 min，1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，分光光度计测定其纯度和浓度。cDNA合成的反应体系按照试剂盒进行：① 5×PrimeScriptTM Buffer（for Real Time） 4 μl; ② PrimeScriptTM RT Enzyme Mix I 1μl;③ Oligo dT Primer（50 μM）1μl;④Random 6 mers（100 μM）1μl;⑤ Total RNA 1μg;⑥ 加RNase Free dH2O至20μl反应体系。反转录反应条件：37℃，15min；85℃，15s反转录成cDNA。 4 、实时定量PCR 采用SYBRGreen嵌合荧光进行反应，按说明书配制25μl的反应体系，①SYBR? Premix Ex TaqTM II（2×）12.5 μl；②PCR Forward Primer（10 μM）1μl；③PCR Reverse Primer（10 μM）1μl； ④模板（cDNA溶液）2μl；⑤dH2O 8.5 μl。阴性对照组加入未反转录的RNA作为模板。上下游引物均由大连宝生物工程有限公司（Takara）设计合成(表1)，反应条件如下：95℃预变性30s，95℃变性5s，58~62℃退火20s，72℃延伸30s同时获取荧光，共40个循环，后行产物的溶解曲线分析, 得到样品量的参数Ct值(循环阈值)。以2-ΔΔCt 表示基因的相对表达量，ΔΔCt=[Ct(待测基因)-Ct(GAPDH)]试验组-[Ct(待测基因)-Ct(GAPDH)]对照组。 5 、ELISA法检测细胞上清液中FN、SAA、TNF蛋白的含量 取不同处理因素作用0h、12h、24h、48h的细胞上清液，无菌管收集，6000转，4℃，离心10分钟，仔细收集上清，后续操作按ELISA试剂盒说明书进行，在酶标仪450nm波长处，以空白对照孔调零，直接测定吸光值，并由标准曲线公式换算成各蛋白的浓度值。 6、 数据分析 所有数据以 表示，采用SPSS 17.0统计分析软件，组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用LSD, Dunnett’s T3，P＜0.05为差异有统计学意义。 [ Last edited by Mally89 on 2011-4-5 at 15:04 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
304求调剂（085602，过四级，一志愿985）
已经有18人回复
-
软工学硕299求调剂
已经有6人回复
-
一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂
已经有6人回复
-
化工调剂303分，过四级
已经有30人回复
-
264求调剂
已经有4人回复
-
生物工程求调剂
已经有9人回复
-
266求调剂
已经有23人回复
-
283求调剂
已经有15人回复
-
22408 一志愿双一流人工智能300分 四六级，数据分析国奖
已经有5人回复
-
286求调剂
已经有17人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
铟锡化合物半导体材料与器件团队[推介]
+3/136
-
宁波大学2026年紧急补招植保方向（昆虫或植病）博士研究生1-2名
+1/93
-
江西科技师范大学物理化学课题组招生，07,08都可，还有名额
+1/92
-
西安石油大学新能源学院接收材料类、能源动力类、机械类、计算机类等专业专硕调剂生！
+1/91
-
上海交通大学化学化工学院膜分离-纳流控课题组诚聘博士后2-3名
+1/90
-
西安石油大学新能源学院接收材料类、能源动力类、机械类、计算机类等专业专硕调剂生！
+1/89
-
欢迎优秀考生调剂江西理工大学稀土学院
+1/86
-
中国石油大学（北京）理学院2026年硕士研究生接收调剂生：物理、化学、材料等
+1/42
-
上海应用技术大学化工与能源催化方向招收考研调剂生
+1/40
-
喀什大学环境生态修复功能材料与技术团队接收2026年调剂研究生
+1/40
-
江西理工大学稀土学院招材料类硕士研究生，稀土光功能材料方向，非诚勿扰
+1/37
-
汕头大学与化学与精细化工广东省实验室联合培养研究生
+5/35
-
抗病毒性传染病创新药物全国重点实验室—接收化学、生物、药学、生物与医药调剂考生
+1/20
-
招生物学0710方向硕士调剂
+2/16
-
西安工程大学环化学院能源环境催化与先进材料课题组招收调剂生
+1/11
-
橡胶草种子求助
+1/10
-
徐工-环境工程学院-招收调剂硕士
+1/4
-
调剂招生
+1/3
-
河南理工大学化学化工学院招收材料、化工类专业调剂研究生
+1/3
-
苏州科技大学胡老师课题组招2026年硕士生若干名
+1/2
2楼2011-03-30 10:37:17
 ！已经为中文了，故如下：1 细胞培养及分组 MCM4201完全培养基常规培养HMCs，置于37℃、饱和湿度5%CO2的孵箱内贴壁传代培养，隔日换液,0.25%胰酶3~4天消化、传代。取6~9代对数生长期细胞，以每孔3~5×105个细胞接种6孔板中，培养细胞待其贴壁融合70%~80%后用无血清Opti-MEM培养基同步化24h，用于RNA转染及不同环境下继续培养。 2、siRNA合成与转染 根据GenBank数据库提供的人SAA全长基因(GenBank Acc. No. NM_001664.2)由美国Invitrogen公司设计合成RNAi的siRNA，SAA-siRNA：5′-GCUCAGACAAAUACUUCCAUGCUCG-3′；HMCs共分7组：（1）正常对照组（NG，含葡萄糖5.5mmol/L）；（2）高糖组（HG，含葡萄糖30mmol/L）；(3)等渗对照组（Man+ NG，含5.5mM葡萄糖及24.5mM的甘露醇）；(4) 波动糖组（FG, 含葡萄糖30mmol/L与含葡萄糖5.5mmol/L MCM培养基每4小时交替培养）；（5）高糖+脂质体对照组（HG+Lipo）；（6）高糖+阴性转染对照组（HG+negative-siRNA）；(7) 高糖+SAA-siRNA组（HG+SAA-siRNA）。以绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein, GFP）标记的siRNA做对照，转染48h后在荧光倒置显微镜下观察GFP的表达，计算转染效率。脂质体瞬时转染方法严格按照Lipofectamine?2000说明书进行。于0h、12h、24h、48h末收集各组细胞上清。 3 、总RNA提取及cDNA的合成 各组分别作用48h后按5×106～1×107个细胞加1ml TRIzol低温吹打，后续操作按Trizol说明书进行，最后用DEPC处理的超纯水溶解RNA，60℃孵育5 min，1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，分光光度计测定其纯度和浓度。cDNA合成的反应体系按照试剂盒进行：① 5×PrimeScriptTM Buffer（for Real Time） 4 μl; ② PrimeScriptTM RT Enzyme Mix I 1μl;③ Oligo dT Primer（50 μM）1μl;④Random 6 mers（100 μM）1μl;⑤ Total RNA 1μg;⑥ 加RNase Free dH2O至20μl反应体系。反转录反应条件：37℃，15min；85℃，15s反转录成cDNA。 4 、实时定量PCR 采用SYBRGreen嵌合荧光进行反应，按说明书配制25μl的反应体系，①SYBR? Premix Ex TaqTM II（2×）12.5 μl；②PCR Forward Primer（10 μM）1μl；③PCR Reverse Primer（10 μM）1μl； ④模板（cDNA溶液）2μl；⑤dH2O 8.5 μl。阴性对照组加入未反转录的RNA作为模板。上下游引物均由大连宝生物工程有限公司（Takara）设计合成(表1)，反应条件如下：95℃预变性30s，95℃变性5s，58~62℃退火20s，72℃延伸30s同时获取荧光，共40个循环，后行产物的溶解曲线分析, 得到样品量的参数Ct值(循环阈值)。以2-ΔΔCt 表示基因的相对表达量，ΔΔCt=[Ct(待测基因)-Ct(GAPDH)]试验组-[Ct(待测基因)-Ct(GAPDH)]对照组。 5 、ELISA法检测细胞上清液中FN、SAA、TNF蛋白的含量 取不同处理因素作用0h、12h、24h、48h的细胞上清液，无菌管收集，6000转，4℃，离心10分钟，仔细收集上清，后续操作按ELISA试剂盒说明书进行，在酶标仪450nm波长处，以空白对照孔调零，直接测定吸光值，并由标准曲线公式换算成各蛋白的浓度值。 6、 数据分析 所有数据以 表示，采用SPSS 17.0统计分析软件，组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用LSD, Dunnett’s T3，P＜0.05为差异有统计学意义。 Keywords: 细胞培养 SiRNA PCR |
3楼2011-03-30 10:38:55
4楼2011-03-30 10:49:37
5楼2011-03-30 10:51:12
哪位大侠知道主题要怎么改呀？？？ 是中文翻译成英文呀 神呐~~~~~~~~ 6楼2011-03-30 10:55:24
supergreen(金币+150, 翻译EPI+1): 大神 好感谢。。 2011-04-05 20:18:18
|
大致翻译了一下，不知符合楼主要求不 https://d.namipan.com/d/0352a2c8 ... d30535230bf00960000 |
7楼2011-04-05 01:18:19
