| 查看: 3861 | 回复: 6 | |||
| 本帖产生 1 个 翻译EPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
几段中文翻译成英文 急求呀 拜托大家帮帮忙
|
|||
|
1 细胞培养及分组 MCM4201完全培养基常规培养HMCs，置于37℃、饱和湿度5%CO2的孵箱内贴壁传代培养，隔日换液,0.25%胰酶3~4天消化、传代。取6~9代对数生长期细胞，以每孔3~5×105个细胞接种6孔板中，培养细胞待其贴壁融合70%~80%后用无血清Opti-MEM培养基同步化24h，用于RNA转染及不同环境下继续培养。 2、siRNA合成与转染 根据GenBank数据库提供的人SAA全长基因(GenBank Acc. No. NM_001664.2)由美国Invitrogen公司设计合成RNAi的siRNA，SAA-siRNA：5′-GCUCAGACAAAUACUUCCAUGCUCG-3′；HMCs共分7组：（1）正常对照组（NG，含葡萄糖5.5mmol/L）；（2）高糖组（HG，含葡萄糖30mmol/L）；(3)等渗对照组（Man+ NG，含5.5mM葡萄糖及24.5mM的甘露醇）；(4) 波动糖组（FG, 含葡萄糖30mmol/L与含葡萄糖5.5mmol/L MCM培养基每4小时交替培养）；（5）高糖+脂质体对照组（HG+Lipo）；（6）高糖+阴性转染对照组（HG+negative-siRNA）；(7) 高糖+SAA-siRNA组（HG+SAA-siRNA）。以绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein, GFP）标记的siRNA做对照，转染48h后在荧光倒置显微镜下观察GFP的表达，计算转染效率。脂质体瞬时转染方法严格按照Lipofectamine?2000说明书进行。于0h、12h、24h、48h末收集各组细胞上清。 3 、总RNA提取及cDNA的合成 各组分别作用48h后按5×106～1×107个细胞加1ml TRIzol低温吹打，后续操作按Trizol说明书进行，最后用DEPC处理的超纯水溶解RNA，60℃孵育5 min，1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，分光光度计测定其纯度和浓度。cDNA合成的反应体系按照试剂盒进行：① 5×PrimeScriptTM Buffer（for Real Time） 4 μl; ② PrimeScriptTM RT Enzyme Mix I 1μl;③ Oligo dT Primer（50 μM）1μl;④Random 6 mers（100 μM）1μl;⑤ Total RNA 1μg;⑥ 加RNase Free dH2O至20μl反应体系。反转录反应条件：37℃，15min；85℃，15s反转录成cDNA。 4 、实时定量PCR 采用SYBRGreen嵌合荧光进行反应，按说明书配制25μl的反应体系，①SYBR? Premix Ex TaqTM II（2×）12.5 μl；②PCR Forward Primer（10 μM）1μl；③PCR Reverse Primer（10 μM）1μl； ④模板（cDNA溶液）2μl；⑤dH2O 8.5 μl。阴性对照组加入未反转录的RNA作为模板。上下游引物均由大连宝生物工程有限公司（Takara）设计合成(表1)，反应条件如下：95℃预变性30s，95℃变性5s，58~62℃退火20s，72℃延伸30s同时获取荧光，共40个循环，后行产物的溶解曲线分析, 得到样品量的参数Ct值(循环阈值)。以2-ΔΔCt 表示基因的相对表达量，ΔΔCt=[Ct(待测基因)-Ct(GAPDH)]试验组-[Ct(待测基因)-Ct(GAPDH)]对照组。 5 、ELISA法检测细胞上清液中FN、SAA、TNF蛋白的含量 取不同处理因素作用0h、12h、24h、48h的细胞上清液，无菌管收集，6000转，4℃，离心10分钟，仔细收集上清，后续操作按ELISA试剂盒说明书进行，在酶标仪450nm波长处，以空白对照孔调零，直接测定吸光值，并由标准曲线公式换算成各蛋白的浓度值。 6、 数据分析 所有数据以 表示，采用SPSS 17.0统计分析软件，组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用LSD, Dunnett’s T3，P＜0.05为差异有统计学意义。 [ Last edited by Mally89 on 2011-4-5 at 15:04 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
写了一篇“相变储能技术在冷库中应用”的论文，论文内容以实验为主，投什么期刊合适？
已经有3人回复
-
需要合成515-64-0，50g，能接单的留言
已经有3人回复
-
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章
已经有10人回复
-
中科院杭州医学所招收博士生一名（生物分析化学、药物递送）
已经有3人回复
-
临港实验室与上科大联培博士招生1名
已经有8人回复
-
26申博自荐
已经有7人回复
-
想换工作。大多数高校都是 评职称时 认可5年内在原单位取得的成果吗？
已经有4人回复
-
带资进组求博导收留
已经有9人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
湖北大学食品安全研究团队诚招博士后
+1/178
-
【高温摩擦磨损试验机】接样/预存款服务
+1/83
-
中国海洋大学与中国水产科学研究院 联合培养 专硕 食品加工与安全
+1/80
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘
+1/79
-
宁波大学招聘科研助理1-2名
+1/52
-
暨南大学理工学院 光子技术研究院段宣明团队申请制读博招生
+1/40
-
有没有在ITO或者FTO玻璃上做好的CdS薄膜购买？
+1/31
-
中科院深圳先进院成会明院士\唐永炳国家杰青团队招聘
+2/28
-
重庆大学前沿院，黄小洋教授课题组，招收2026年非均相催化方向学术博士2名
+1/19
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘-有机化学，金属有机
+1/14
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘-有机化学，金属有机
+1/13
-
国家青年人才叶立群教授课题组招收2026级博士研究生
+1/12
-
北京理工大学计算材料化学课题组招聘2026年博士生/博后
+3/12
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘
+1/8
-
北京理工大学原子团簇团队博士后招聘公告（长期有效）
+1/7
-
中国地质大学（武汉）戴志高课题组诚招2026级硕博研究生
+1/5
-
南京林业大学”申请-考核”制学术学位博士研究生招生
+1/5
-
山东大学集成电路学院博士招生1名
+1/4
-
澳门大学 应用物理及材料工程研究院 孙国星课题组招收博士（2026/2027学年）
+1/3
-
河南师范大学植物生殖生物学科研团队博士招聘
+1/2
4楼2011-03-30 10:49:37
2楼2011-03-30 10:37:17
 ！已经为中文了，故如下：1 细胞培养及分组 MCM4201完全培养基常规培养HMCs，置于37℃、饱和湿度5%CO2的孵箱内贴壁传代培养，隔日换液,0.25%胰酶3~4天消化、传代。取6~9代对数生长期细胞，以每孔3~5×105个细胞接种6孔板中，培养细胞待其贴壁融合70%~80%后用无血清Opti-MEM培养基同步化24h，用于RNA转染及不同环境下继续培养。 2、siRNA合成与转染 根据GenBank数据库提供的人SAA全长基因(GenBank Acc. No. NM_001664.2)由美国Invitrogen公司设计合成RNAi的siRNA，SAA-siRNA：5′-GCUCAGACAAAUACUUCCAUGCUCG-3′；HMCs共分7组：（1）正常对照组（NG，含葡萄糖5.5mmol/L）；（2）高糖组（HG，含葡萄糖30mmol/L）；(3)等渗对照组（Man+ NG，含5.5mM葡萄糖及24.5mM的甘露醇）；(4) 波动糖组（FG, 含葡萄糖30mmol/L与含葡萄糖5.5mmol/L MCM培养基每4小时交替培养）；（5）高糖+脂质体对照组（HG+Lipo）；（6）高糖+阴性转染对照组（HG+negative-siRNA）；(7) 高糖+SAA-siRNA组（HG+SAA-siRNA）。以绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein, GFP）标记的siRNA做对照，转染48h后在荧光倒置显微镜下观察GFP的表达，计算转染效率。脂质体瞬时转染方法严格按照Lipofectamine?2000说明书进行。于0h、12h、24h、48h末收集各组细胞上清。 3 、总RNA提取及cDNA的合成 各组分别作用48h后按5×106～1×107个细胞加1ml TRIzol低温吹打，后续操作按Trizol说明书进行，最后用DEPC处理的超纯水溶解RNA，60℃孵育5 min，1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，分光光度计测定其纯度和浓度。cDNA合成的反应体系按照试剂盒进行：① 5×PrimeScriptTM Buffer（for Real Time） 4 μl; ② PrimeScriptTM RT Enzyme Mix I 1μl;③ Oligo dT Primer（50 μM）1μl;④Random 6 mers（100 μM）1μl;⑤ Total RNA 1μg;⑥ 加RNase Free dH2O至20μl反应体系。反转录反应条件：37℃，15min；85℃，15s反转录成cDNA。 4 、实时定量PCR 采用SYBRGreen嵌合荧光进行反应，按说明书配制25μl的反应体系，①SYBR? Premix Ex TaqTM II（2×）12.5 μl；②PCR Forward Primer（10 μM）1μl；③PCR Reverse Primer（10 μM）1μl； ④模板（cDNA溶液）2μl；⑤dH2O 8.5 μl。阴性对照组加入未反转录的RNA作为模板。上下游引物均由大连宝生物工程有限公司（Takara）设计合成(表1)，反应条件如下：95℃预变性30s，95℃变性5s，58~62℃退火20s，72℃延伸30s同时获取荧光，共40个循环，后行产物的溶解曲线分析, 得到样品量的参数Ct值(循环阈值)。以2-ΔΔCt 表示基因的相对表达量，ΔΔCt=[Ct(待测基因)-Ct(GAPDH)]试验组-[Ct(待测基因)-Ct(GAPDH)]对照组。 5 、ELISA法检测细胞上清液中FN、SAA、TNF蛋白的含量 取不同处理因素作用0h、12h、24h、48h的细胞上清液，无菌管收集，6000转，4℃，离心10分钟，仔细收集上清，后续操作按ELISA试剂盒说明书进行，在酶标仪450nm波长处，以空白对照孔调零，直接测定吸光值，并由标准曲线公式换算成各蛋白的浓度值。 6、 数据分析 所有数据以 表示，采用SPSS 17.0统计分析软件，组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用LSD, Dunnett’s T3，P＜0.05为差异有统计学意义。 Keywords: 细胞培养 SiRNA PCR |
3楼2011-03-30 10:38:55
5楼2011-03-30 10:51:12