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银虫 (初入文坛)

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[求助] RNA纯度是否会影响RT-PCR的结果已有4人参与

各位虫友们，大家好，我提取的RNA,OD260/OD230都小于1可以用来做RT-PCR吗？影响大不大？

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1楼 2014-03-14 20:16:37

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若溪

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

个人经验，260/230偏小的话，那就是提取的时候有机试剂有残留，提取时可以改进以下几点：
1.加氯仿抽提后取少一点上清，不要贪多。
2.加乙醇洗的时候，多晃几次，尽量让RNA沉淀整片悬浮起来（有时候确实浮不起来也没办法。）
3.弃乙醇的时候，用枪吸而不是倾倒，倒的话经常有液滴留在管壁上，倒不干净。第一次用蓝枪头吸，可以不完全吸干，免得吸到沉淀；然后短暂离心把残余酒精甩到管底，看准了用白枪头尽量吸干净。RNA量大，被白枪头弄掉一点也没关系。
4.溶解前晾干的时间可以长一点，5分钟也没关系的。标准的做法说是不能晾太久，等沉淀开始变透明就要加水溶解，但是我晾过10分钟的，后面RNA量也很大。可能量大，虽然有些溶解不了，最后浓度还是高。