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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA是直接加Trizol还是胰酶消化后加Trizol？
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[交流] 提取RNA是直接加Trizol还是胰酶消化后加Trizol？

本人最近在做从哺乳动物细胞中提取RNA，细胞是贴壁生长的，以往提取的时候是先用胰酶消化收集细胞后再加入TRizol，原来细胞培养瓶的底面积是3.5平方厘米，但是加入Trizol的量是1ml，因为细胞的数目在700万左右，结果提取效果一般，但是做RT-PCR也可扩增出目的基因。最近要在六孔板中做，依据大家的经验，是直接加Trizol提取RNA效果好还是胰酶消化细胞后提取RNA的效果后，请有经验的朋友帮助解答一下，资源共享，谢谢！
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1楼 2012-10-08 12:43:21
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jyjydd at 2012-10-08 13:12:23

，对您感到很遗憾
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5楼2012-10-08 13:50:24
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dajiong

金虫 (正式写手)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
其实培养瓶里可以不用消化直接加trizol就能做的。反正细胞都会裂解掉。所以六孔板我认为应该也不需要加胰酶。
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6楼2012-10-08 23:10:48
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
PBS洗两次后直接加trizol
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7楼2012-10-09 09:08:54
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qszxmc

铜虫 (小有名气)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
祝贺

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2012-10-09 10:21:19
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jiangxl

金虫 (著名写手)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
我是直接加trizol，没消化过，觉得消化好像是多此一举。
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9楼2012-10-09 10:23:08
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jl860822

金虫 (正式写手)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
我先消化一下，装到EP管中，然后再加Trizol，效果也很好
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10楼2012-10-09 19:58:48
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dajiong at 2012-10-08 23:10:48
其实培养瓶里可以不用消化直接加trizol就能做的。反正细胞都会裂解掉。所以六孔板我认为应该也不需要加胰酶。

谢谢啊！
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11楼2012-10-10 15:14:05
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jl860822 at 2012-10-09 19:58:48
我先消化一下，装到EP管中，然后再加Trizol，效果也很好

恩 我的同学也是这样子做的，结果也是很好！ 我还是放在六孔板里做吧，谢谢了！！
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12楼2012-10-10 15:15:23
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dajiong at 2012-10-08 23:10:48
其实培养瓶里可以不用消化直接加trizol就能做的。反正细胞都会裂解掉。所以六孔板我认为应该也不需要加胰酶。

恩，谢谢解答！
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14楼2012-10-10 15:18:11
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sxxuan at 2012-10-09 09:08:54
PBS洗两次后直接加trizol

，打算采用您的方法试一试
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15楼2012-10-10 15:18:56
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jl860822

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by czcpudai at 2012-10-10 15:15:23
恩 我的同学也是这样子做的，结果也是很好！ 我还是放在六孔板里做吧，谢谢了！！...

只要细胞不死就OK，RNase就不会起作用，而消化的时候细胞是不会死的，所以不会对RNA有影响的
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16楼2012-10-10 15:26:23
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zy_rebecca

新虫 (初入文坛)
★ ★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-10 19:30:52
这么小的瓶子，trizol量可以减少，就是6孔板的话，500μl也够了，不建议6孔板，据我们实验室老师们以前的经验，板子提RNA比较容易降解，所以我也没用板子提过，而且一次同时提取量不要超过4瓶，否则也易降解
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17楼2012-10-10 17:04:58
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xlblank

新虫 (正式写手)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
xlblank回复
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18楼2012-10-10 19:09:26
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dajiong

金虫 (正式写手)
干嘛要谢两次。。。
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19楼2012-10-10 19:53:41
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古贝壳

新虫 (初入文坛)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
您好，我是用qiagen试剂盒的裂解液裂解细胞的，只在培养瓶里静置了两分钟，提出来rna的浓度很低，请问是和裂解时间短有关系吗？但是说明书上也没有写静置时间？

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20楼2017-03-21 09:26:47
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蔚蓝97

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
pbs洗去培养基后直接加trizol就可以了

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21楼2017-03-21 17:55:39
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yaland2楼
2012-10-08 12:57   回复  
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
jyjydd3楼
2012-10-08 13:12   回复  
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
czcpudai4楼
2012-10-08 13:50   回复  
引用回帖:
2楼: Originally posted by yaland at 2012-10-08 12:57:19

czcpudai13楼
2012-10-10 15:15   回复  
引用回帖:
9楼: Originally posted by jiangxl at 2012-10-09 10:23:08 我是直接加trizol，没消化过，觉得消化好像是多此一举。

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