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提取RNA是直接加Trizol还是胰酶消化后加Trizol?
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czcpudai
铜虫
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虫号: 1626622
[交流]
提取RNA是直接加Trizol还是胰酶消化后加Trizol?
本人最近在做从哺乳动物细胞中提取RNA,细胞是贴壁生长的,以往提取的时候是先用胰酶消化收集细胞后再加入TRizol,原来细胞培养瓶的底面积是3.5平方厘米,但是加入Trizol的量是1ml,因为细胞的数目在700万左右,结果提取效果一般,但是做RT-PCR也可扩增出目的基因。最近要在六孔板中做,依据大家的经验,是直接加Trizol提取RNA效果好还是胰酶消化细胞后提取RNA的效果后,请有经验的朋友帮助解答一下,资源共享,谢谢!
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2012-10-08 12:43:21
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zy_rebecca
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czcpudai(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流
2012-10-10 19:30:52
这么小的瓶子,trizol量可以减少,就是6孔板的话,500μl也够了,不建议6孔板,据我们实验室老师们以前的经验,板子提RNA比较容易降解,所以我也没用板子提过,而且一次同时提取量不要超过4瓶,否则也易降解
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17楼
2012-10-10 17:04:58
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czcpudai
铜虫
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3楼
:
Originally posted by
jyjydd
at 2012-10-08 13:12:23
,对您感到很遗憾
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5楼
2012-10-08 13:50:24
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dajiong
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★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
其实培养瓶里可以不用消化直接加trizol就能做的。反正细胞都会裂解掉。所以六孔板我认为应该也不需要加胰酶。
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6楼
2012-10-08 23:10:48
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sxxuan
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★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
PBS洗两次后直接加trizol
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7楼
2012-10-09 09:08:54
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czcpudai
4楼
2012-10-08 13:50
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2楼
:
Originally posted by
yaland
at 2012-10-08 12:57:19
czcpudai
13楼
2012-10-10 15:15
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9楼
:
Originally posted by
jiangxl
at 2012-10-09 10:23:08 我是直接加trizol,没消化过,觉得消化好像是多此一举。
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