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wazlf

银虫 (正式写手)

[求助] 如何用trizol试剂保存RNA提取材料？请各位前辈指点指点，不甚感激！

如何用trizol试剂保存RNA提取材料？请各位前辈指点指点，不甚感激！

我现在刚刚开始做RNA，由于实验材料比较坚韧，不易研磨，导致RNA提取困难。我听人说可以用trizol保存用液氮研磨好的组织，不知道行不行？
恳请各位前辈指点，非常感谢！
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失败不是成功之母，是贻误战机！
1楼2012-04-27 17:28:27
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+4, Good！ 2012-05-12 23:11:26
楼上说的
1、泡泡你的研钵或高温烤，OK。但用前研钵一定要-80平衡，温度高那个液氮损失的不像样
2、组织在砸前要浸泡在液氮里，弄时，加一点液氮沿一下下，液氮快没了赶快加。做的过程要尽量得快，后期温度极低时，加入液氮会沸的（这个原因我还真不太清楚）

研钵不太好用，组织块容易溅出。  我后来用一器物很好用，铁的，类似于电视上看到的手榴弹，头和把手是分开的，相接触的部分想螺丝螺母那个样子，头能包住把手前面的一部分，把组织块放进头里，加点液氮，然后把手放在头里面，一锤子就搞定，用着很是爽块。。。。。。。。。。。
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
9楼2012-05-12 10:30:57
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
不是公司的，找了个铁匠做的
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
11楼2012-05-12 19:58:58
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普通回帖

hanghongtao

新虫 (初入文坛)
★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-04-27 18:39:45
我也是刚开始对植物做分子相关的实验，由于我的植物材料叶片含多酚多糖，不容易提取RNA，用Trizol试剂可以比较容易提取其他容易提取的材料，你要想保存RNA,恐怕在超低温冰箱里-70℃，也会降解，所以不要保存太久。但如果反转录成cDNA的话，还是比RNA要稳定些，不知道对你有没有帮助啊
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wazlf
2楼2012-04-27 17:39:52
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wazlf

银虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by hanghongtao at 2012-04-27 17:39:52:
我也是刚开始对植物做分子相关的实验，由于我的植物材料叶片含多酚多糖，不容易提取RNA，用Trizol试剂可以比较容易提取其他容易提取的材料，你要想保存RNA,恐怕在超低温冰箱里-70℃，也会降解，所以不要保存太久。 ...

我是想保存研磨后的材料，留着慢慢提取RNA，因为研磨比较困难，要到别的实验室借液氮研磨，而且实验室仪器有限，超级不方便，所以想把研磨后的材料加trizol，保存在超低温冰箱中，不知道行不行？
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失败不是成功之母，是贻误战机！
3楼2012-04-27 17:48:52
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wazlf: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-27 18:16:08
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-28 08:32:03
wazlf: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 非常感谢对我的问题的仔细回答！ 2012-04-28 20:39:30
嗯...............
可以哟，研磨充分后，加入TRIzol，充分涡旋至匀浆完全化后就可以液氮速冻，-80度保存了，至少可以保存数月的。
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Let God do with it as He wills
4楼2012-04-27 17:50:14
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wazlf

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-27 17:50:14:
嗯...............
可以哟，研磨充分后，加入TRIzol，充分涡旋至匀浆完全化后就可以液氮速冻，-80度保存了，至少可以保存数月的。

能把步骤说的更具体些吗？谢谢了！
我做的是动物组织的表皮，非常坚韧，在研钵里仔细研磨能不能算完全匀浆？
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5楼2012-04-27 18:18:55
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njyang2006

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wazlf: 金币+1, ★有帮助, 我问的就是液氮，呵呵……还是感谢！ 2012-05-08 09:38:43
还是用液氮研磨吧。
在网上搜一下protocol吧。
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6楼2012-05-07 22:58:12
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c19345174

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜: 金币+3, 鼓励交流 2012-05-11 17:34:42
步骤：建议取新鲜表皮（液氮中或-80冰箱保存的表皮），称重后记录！研钵预先用液氮 预冷，然后倒入2/3体积液氮，倒入样品，保持研钵中的样品一直被液氮浸泡，样品冻实后用敲打，碾压，研磨！尽量细！液氮挥干后加入相应体积trizol，漩涡混匀或者用力上下颠倒混匀，密封，放入-80或者液氮中保存！一年半年的都没事！取出来时先放气，再梯度降至4度！正常用！
希望有所帮助
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7楼2012-05-11 14:43:12
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julin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-12 15:42:42
如果组织坚硬的化，可以在液氮下研磨。
步骤：1.取用DEPC水浸泡过夜并高温灭菌的研钵一个（或用酒精烧过的），向其中加入液氮预冷研钵（液氮不易挥发时即可）。
2.将组织倒入研钵中，加液氮使组织冷冻，研磨，直到组织完全变成粉末为止，在此期间不要让组织暴露在空气中，要在液氮下研磨。
3.在组织研磨合格后，让液氮挥发且还没有解冻时，向研钵中加入Trizol试剂，大概每50-100mg加入1mlTrizol，再继续研磨直至样品溶解，在进行后续操作即可
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8楼2012-05-11 19:07:48
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wazlf

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by telomerase at 2012-05-12 10:30:57:
楼上说的
1、泡泡你的研钵或高温烤，OK。但用前研钵一定要-80平衡，温度高那个液氮损失的不像样
2、组织在砸前要浸泡在液氮里，弄时，加一点液氮沿一下下，液氮快没了赶快加。做的过程要尽量得快，后期温度极低 ...

这是什么东西啊？没见过，能推荐一下哪个厂家，或者给个链接？
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失败不是成功之母，是贻误战机！
10楼2012-05-12 15:24:58
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