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wazlf

银虫 (正式写手)

[求助] 如何用trizol试剂保存RNA提取材料?请各位前辈指点指点,不甚感激!

如何用trizol试剂保存RNA提取材料?请各位前辈指点指点,不甚感激!

我现在刚刚开始做RNA,由于实验材料比较坚韧,不易研磨,导致RNA提取困难。我听人说可以用trizol保存用液氮研磨好的组织,不知道行不行?
恳请各位前辈指点,非常感谢!
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julin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-12 15:42:42
如果组织坚硬的化,可以在液氮下研磨。
步骤:1.取用DEPC水浸泡过夜并高温灭菌的研钵一个(或用酒精烧过的),向其中加入液氮预冷研钵(液氮不易挥发时即可)。
2.将组织倒入研钵中,加液氮使组织冷冻,研磨,直到组织完全变成粉末为止,在此期间不要让组织暴露在空气中,要在液氮下研磨。
3.在组织研磨合格后,让液氮挥发且还没有解冻时,向研钵中加入Trizol试剂,大概每50-100mg加入1mlTrizol,再继续研磨直至样品溶解,在进行后续操作即可
8楼2012-05-11 19:07:48
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hanghongtao

新虫 (初入文坛)

★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-04-27 18:39:45
我也是刚开始对植物做分子相关的实验,由于我的植物材料叶片含多酚多糖,不容易提取RNA,用Trizol试剂可以比较容易提取其他容易提取的材料,你要想保存RNA,恐怕在超低温冰箱里-70℃,也会降解,所以不要保存太久。但如果反转录成cDNA的话,还是比RNA要稳定些,不知道对你有没有帮助啊

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2楼2012-04-27 17:39:52
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wazlf

银虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by hanghongtao at 2012-04-27 17:39:52:
我也是刚开始对植物做分子相关的实验,由于我的植物材料叶片含多酚多糖,不容易提取RNA,用Trizol试剂可以比较容易提取其他容易提取的材料,你要想保存RNA,恐怕在超低温冰箱里-70℃,也会降解,所以不要保存太久。 ...

我是想保存研磨后的材料,留着慢慢提取RNA,因为研磨比较困难,要到别的实验室借液氮研磨,而且实验室仪器有限,超级不方便,所以想把研磨后的材料加trizol,保存在超低温冰箱中,不知道行不行?
失败不是成功之母,是贻误战机!
3楼2012-04-27 17:48:52
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wazlf: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-27 18:16:08
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-28 08:32:03
wazlf: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 非常感谢对我的问题的仔细回答! 2012-04-28 20:39:30
嗯...............
可以哟,研磨充分后,加入TRIzol,充分涡旋至匀浆完全化后就可以液氮速冻,-80度保存了,至少可以保存数月的。
Let God do with it as He wills
4楼2012-04-27 17:50:14
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