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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA是直接加Trizol还是胰酶消化后加Trizol？
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[交流] 提取RNA是直接加Trizol还是胰酶消化后加Trizol？

本人最近在做从哺乳动物细胞中提取RNA，细胞是贴壁生长的，以往提取的时候是先用胰酶消化收集细胞后再加入TRizol，原来细胞培养瓶的底面积是3.5平方厘米，但是加入Trizol的量是1ml，因为细胞的数目在700万左右，结果提取效果一般，但是做RT-PCR也可扩增出目的基因。最近要在六孔板中做，依据大家的经验，是直接加Trizol提取RNA效果好还是胰酶消化细胞后提取RNA的效果后，请有经验的朋友帮助解答一下，资源共享，谢谢！
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1楼 2012-10-08 12:43:21
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古贝壳

新虫 (初入文坛)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
您好，我是用qiagen试剂盒的裂解液裂解细胞的，只在培养瓶里静置了两分钟，提出来rna的浓度很低，请问是和裂解时间短有关系吗？但是说明书上也没有写静置时间？

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20楼2017-03-21 09:26:47
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jyjydd at 2012-10-08 13:12:23

，对您感到很遗憾
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5楼2012-10-08 13:50:24
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dajiong

金虫 (正式写手)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
其实培养瓶里可以不用消化直接加trizol就能做的。反正细胞都会裂解掉。所以六孔板我认为应该也不需要加胰酶。
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6楼2012-10-08 23:10:48
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
czcpudai(金币+1): 谢谢参与
PBS洗两次后直接加trizol
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7楼2012-10-09 09:08:54
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czcpudai4楼
2012-10-08 13:50   回复  
引用回帖:
2楼: Originally posted by yaland at 2012-10-08 12:57:19

czcpudai13楼
2012-10-10 15:15   回复  
引用回帖:
9楼: Originally posted by jiangxl at 2012-10-09 10:23:08 我是直接加trizol，没消化过，觉得消化好像是多此一举。

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