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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

[交流] 谁做过双链RNA的RT-PCR 已有1人参与

最近在做双链RNA的RT-PCR,此双链RNA比较特殊,不含polyA序列,因此本人采用目标引物直接进行RT反应,可是最终扩出来的电泳带却呈弥散的一片,请帮我分析一下这是什么原因,我该如何继续实验?按道理讲,这时所扩增出来的这些弥散带都应该是两端含有我所设计引物的DNA片段,由于我设计的上下游引物分别加了起始和终止密码,那么我能否将这种弥散的DNA构建入表达载体中,让他们表达,从而希望获得各种不同氨基酸序列的多肽?
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

sorry,可能我说的不太明确,我是用GSP引物做的RT,扩增完一链后,还是用这对引物进行PCR,结果出现的就是弥散带,我本意是想扩增特异性带的。最近在网上看invitrogren公司有可在高温(60度)条件下进行RT的试剂盒,不知用这种试剂盒行否?另外,有人认为我进行的是双链RNA的RT,因此在RT之前,应先将引物和RNA混合在80度变性10min,然后在室温放置10min。而我在公司的试剂盒说明中看到,对于具有复杂二级结构的RNA要先在65度(说超过65度RNA开始降解)5min,然后立即冰浴1-2min。不知道这两种方式对于双链RNA的RT来说哪种更好些?
3楼2009-03-17 14:14:02
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

mRNArt之后的cDNA做agarose gel的时候就是弥散的,正常;你应当再pcr一下rt之后的cDNA看看,这时应当有带
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-03-15 16:56:10
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

求助微生物方面的给鉴定一下

最近本人做材料抗菌实验室,发现在实验琼脂平板上除了长有正常的大肠杆菌菌落(用大肠杆菌做为实验菌)外,还长有类似梅花状的大片菌苔物(比大肠杆菌菌落大得多,且边缘不规则),没有取材鉴定是什么,菌苔颜色与大肠杆菌一样,想问问能是什么?
4楼2011-01-10 23:19:01
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

补充

引用回帖:
Originally posted by xbburton at 2011-01-10 23:19:01:
最近本人做材料抗菌实验室,发现在实验琼脂平板上除了长有正常的大肠杆菌菌落(用大肠杆菌做为实验菌)外,还长有类似梅花状的大片菌苔物(比大肠杆菌菌落大得多,且边缘不规则),没有取材鉴定是什么,菌苔颜色与 ...

具体图片见附件,第一张为待鉴定之物,第二张是同时养的长出大肠杆菌菌落图
5楼2011-01-10 23:23:44
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