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晓夜

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】普通PCR和荧光实时定量PCR为何结果不同？

我要检测一个基因在牛卵不同时期的表达情况，可以分为1，2，3，4，5共5个时期，但是普通PCR后电泳，结果是1，2没有条带，3，4，5都有较明显的条带。荧光实时定量PCR后，分析出的柱状图显示第5个时期表达量最小，其他1，2，3，4都比5的表达量高，这是为什么呢？？？另外，我把荧光实时定量PCR后的产物电泳，结果是1，2，3，4，5时期都有170bp的条带（荧光实时定量的产物为170bp），跟柱状图结果应该一直。但是普通PCR明明是1，2没有目的条带啊！
注：我检测的基因片段为540，普通PCR扩增的是整个基因540bp，而荧光定量扩的该基因其中一段170bp，荧光定量引物没有问题（已验证）
求高人指点一二啊，本人不胜感激。谢谢！！！

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1楼 2010-12-19 09:24:05

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
dhd997(金币+2):good 2010-12-19 09:32:10
晓夜(金币+1): 谢谢啦 2011-04-26 00:02:22

首先做定量有没有用内参校正？
其次，普通PCR你的模板是什么？gDNA还是cDNA？
第三，普通PCR的循环数是多少？

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2楼2010-12-19 09:29:19

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晓夜

金虫 (小有名气)

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内参校正不太明白，我用的是CDNA，实时定量和普通PCR都是40个循环。

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3楼2010-12-20 23:04:46

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晓夜

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引用回帖:

Originally posted by 晓夜 at 2010-12-19 09:24:05:
我要检测一个基因在牛卵不同时期的表达情况，可以分为1，2，3，4，5共5个时期，但是普通PCR后电泳，结果是1，2没有条带，3，4，5都有较明显的条带。荧光实时定量PCR后，分析出的柱状图显示第5个时期表达量最小，其 ...

内参校正不太明白，我用的是CDNA，实时定量和普通PCR都是40个循环。
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2714927&pid=1164641&page=1#pid1164641

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4楼2010-12-20 23:05:16

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