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【求助/交流】普通PCR和荧光实时定量PCR为何结果不同？
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我要检测一个基因在牛卵不同时期的表达情况，可以分为1，2，3，4，5共5个时期，但是普通PCR后电泳，结果是1，2没有条带，3，4，5都有较明显的条带。荧光实时定量PCR后，分析出的柱状图显示第5个时期表达量最小，其他1，2，3，4都比5的表达量高，这是为什么呢？？？另外，我把荧光实时定量PCR后的产物电泳，结果是1，2，3，4，5时期都有170bp的条带（荧光实时定量的产物为170bp），跟柱状图结果应该一直。 但是普通PCR明明是1，2没有目的条带啊！ 注：我检测的基因片段为540，普通PCR扩增的是整个基因540bp，而荧光定量扩的该基因其中一段170bp，荧光定量引物没有问题（已验证） 求高人指点一二啊，本人不胜感激。谢谢！！！ |
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2楼2010-12-19 09:29:19
3楼2010-12-20 23:04:46
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内参校正不太明白，我用的是CDNA，实时定量和普通PCR都是40个循环。 本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2714927&pid=1164641&page=1#pid1164641 |
4楼2010-12-20 23:05:16
看来你还没明白实时定量和半定量的原理啊~~5楼2010-12-20 23:34:39