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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】实时荧光定量PCR的扩增效率低该如何改进？
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dongfangzz

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】实时荧光定量PCR的扩增效率低该如何改进？ 已有5人参与

实时荧光定量PCR（染料法）的指数扩增期曲线上升较平缓，斜率较低。分析应该是扩增效率低。做了两组标本，3个基因。Ct值最早的出现在15个循环，晚的在31个循环。

请问
斜率低的原因是什么呀？
该如何改进呢？

[ Last edited by dongfangzz on 2010-10-10 at 23:13 ]
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1楼 2010-10-09 18:59:45
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魔弈

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王会征 at 2010-10-11 20:50:39
可能的原因之一是模板的拷贝数低，也就是你反转录效率不高，可以尝试更高质量RNA的提取及反转录实验。

引物效率106%是怎么回事？
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黎明前最黑暗
6楼2014-05-24 11:02:13
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dongfangzz

银虫 (小有名气)
现在的讨论怎么不激烈呀
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2楼2010-10-11 20:39:12
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-12 00:00:56
可能的原因之一是模板的拷贝数低，也就是你反转录效率不高，可以尝试更高质量RNA的提取及反转录实验。
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3楼2010-10-11 20:50:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
scelab(金币+1):谢谢交流！:tiger06: 2010-10-12 00:01:02
重新设计引物，优化反应体系和条件，买好的试剂~
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-10-11 23:24:20
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