应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量PCR
71/1返回列表
查看: 1263  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lij2

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR

请教各位高手：我是以质粒序列设计的引物和探针，想测定粪便中该菌的量。但现在遇到一个难题：我用纯菌提的基因组DNA做PCR做不出来，用质粒能做出来。粪便细菌又只有基因DNA提取的方法。
基因组试剂盒是可以连质粒一起提出来的吧，可PCR却做不出来，该怎么办？有从粪便提质粒的方法吗？还是该怎么优化PCR条件？
请指教！！！多谢多谢~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-09 15:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2):热心版版，good 2011-01-09 16:39:36
lij2(金币+1): 2011-01-11 13:14:12
是否该菌在正常条件下没有了该质粒了，而你又是用质粒设计的引物，建议你提取菌的基因组DNA，找出保守序列，设计引物，检测该菌的含量。
荧光定量PCR对引物要求很高，退火温度等可以在60度左右，尽量避免污染！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-09 15:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genetics183

木虫 (正式写手)
lij2(金币+1): 2011-01-11 13:14:16
提基因组的试剂不能提质粒。
反之，亦然。
赞一下 回复此楼
3楼2011-01-09 16:52:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-09 15:15:29:
是否该菌在正常条件下没有了该质粒了，而你又是用质粒设计的引物，建议你提取菌的基因组DNA，找出保守序列，设计引物，检测该菌的含量。
荧光定量PCR对引物要求很高，退火温度等可以在60度左右，尽量避免污染！

我是同一管菌，1ml提质粒，1ml提基因组DNA
基因组DNA设计不出特异的引物和探针，很苦恼啊
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-09 16:56:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by genetics183 at 2011-01-09 16:52:53:
提基因组的试剂不能提质粒。
反之，亦然。

提基因组DNA的试剂盒提出来的DNA包括了质粒吧
赞一下 回复此楼
5楼2011-01-09 16:57:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)
继续求助
回复此楼
6楼2011-01-10 12:33:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
顶一个
回复此楼
7楼2011-01-10 19:01:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lij2 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 11408。358求调剂 +3 TMYzds 2026-04-07 3/150 2026-04-11 17:10 by 氮气气气
[考研] 297求调剂 +13 ORCHID1 2026-04-10 14/700 2026-04-11 11:36 by flapl
[考研] 一志愿211，0703化学305分求调剂 +21 严西西戏 2026-04-06 27/1350 2026-04-11 10:56 by 1028907439
[考研] 290求调剂 +8 luoziheng 2026-04-10 8/400 2026-04-11 10:48 by qingpingzhu
[考研] 085500求调剂材料 +10 易11122 2026-04-09 10/500 2026-04-11 10:39 by maddjdld
[考研] 080100力学316求调剂 +8 L_Hairui 2026-04-07 8/400 2026-04-11 10:00 by zhq0425
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 生物学308求调剂（一志愿华东师大） +6 相信必会光芒万� 2026-04-10 6/300 2026-04-11 05:23 by zhuwenxu
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 0703调剂 +19 拾玖壹 2026-04-04 22/1100 2026-04-10 22:16 by bljnqdcc
[考研] 314求调剂 +18 xhhdjdjsjks 2026-04-09 19/950 2026-04-10 18:53 by HPUCZ
[考研] 青岛科技大学材料学院，环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-05 15/750 2026-04-09 13:36 by 故人??
[考研] 求助071001调剂！！！ +7 黄守松 2026-04-05 8/400 2026-04-09 09:07 by 徐良白眉大侠
[考研] 求调剂 +7 chenxrlkx 2026-04-05 9/450 2026-04-09 09:04 by wj165256
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 专硕085403，291分，有两篇专利，一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +11 zyx上岸！ 2026-04-05 11/550 2026-04-05 22:13 by dongzh2009
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭