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lij2

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR

请教各位高手:我是以质粒序列设计的引物和探针,想测定粪便中该菌的量。但现在遇到一个难题:我用纯菌提的基因组DNA做PCR做不出来,用质粒能做出来。粪便细菌又只有基因DNA提取的方法。
基因组试剂盒是可以连质粒一起提出来的吧,可PCR却做不出来,该怎么办?有从粪便提质粒的方法吗?还是该怎么优化PCR条件?
请指教!!!多谢多谢~~~
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翱宇

禁虫 (正式写手)


★ ★
dhd997(金币+2):热心版版,good 2011-01-09 16:39:36
lij2(金币+1): 2011-01-11 13:14:12
是否该菌在正常条件下没有了该质粒了,而你又是用质粒设计的引物,建议你提取菌的基因组DNA,找出保守序列,设计引物,检测该菌的含量。
荧光定量PCR对引物要求很高,退火温度等可以在60度左右,尽量避免污染!
2楼2011-01-09 15:15:29
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genetics183

木虫 (正式写手)


lij2(金币+1): 2011-01-11 13:14:16
提基因组的试剂不能提质粒。
反之,亦然。
3楼2011-01-09 16:52:53
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lij2

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-09 15:15:29:
是否该菌在正常条件下没有了该质粒了,而你又是用质粒设计的引物,建议你提取菌的基因组DNA,找出保守序列,设计引物,检测该菌的含量。
荧光定量PCR对引物要求很高,退火温度等可以在60度左右,尽量避免污染!

我是同一管菌,1ml提质粒,1ml提基因组DNA
基因组DNA设计不出特异的引物和探针,很苦恼啊
4楼2011-01-09 16:56:46
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lij2

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by genetics183 at 2011-01-09 16:52:53:
提基因组的试剂不能提质粒。
反之,亦然。

提基因组DNA的试剂盒提出来的DNA包括了质粒吧
5楼2011-01-09 16:57:36
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lij2

金虫 (小有名气)


继续求助
6楼2011-01-10 12:33:51
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j2

木虫 (正式写手)


顶一个
7楼2011-01-10 19:01:50
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