24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 1267  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lij2

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR

请教各位高手:我是以质粒序列设计的引物和探针,想测定粪便中该菌的量。但现在遇到一个难题:我用纯菌提的基因组DNA做PCR做不出来,用质粒能做出来。粪便细菌又只有基因DNA提取的方法。
基因组试剂盒是可以连质粒一起提出来的吧,可PCR却做不出来,该怎么办?有从粪便提质粒的方法吗?还是该怎么优化PCR条件?
请指教!!!多谢多谢~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-09 15:15:29:
是否该菌在正常条件下没有了该质粒了,而你又是用质粒设计的引物,建议你提取菌的基因组DNA,找出保守序列,设计引物,检测该菌的含量。
荧光定量PCR对引物要求很高,退火温度等可以在60度左右,尽量避免污染!

我是同一管菌,1ml提质粒,1ml提基因组DNA
基因组DNA设计不出特异的引物和探针,很苦恼啊
4楼2011-01-09 16:56:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

翱宇

禁虫 (正式写手)


★ ★
dhd997(金币+2):热心版版,good 2011-01-09 16:39:36
lij2(金币+1): 2011-01-11 13:14:12
是否该菌在正常条件下没有了该质粒了,而你又是用质粒设计的引物,建议你提取菌的基因组DNA,找出保守序列,设计引物,检测该菌的含量。
荧光定量PCR对引物要求很高,退火温度等可以在60度左右,尽量避免污染!
2楼2011-01-09 15:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genetics183

木虫 (正式写手)


lij2(金币+1): 2011-01-11 13:14:16
提基因组的试剂不能提质粒。
反之,亦然。
3楼2011-01-09 16:52:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by genetics183 at 2011-01-09 16:52:53:
提基因组的试剂不能提质粒。
反之,亦然。

提基因组DNA的试剂盒提出来的DNA包括了质粒吧
5楼2011-01-09 16:57:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +7 lzmk 2026-04-14 7/350 2026-04-14 17:02 by lihaoda1994
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +3 qut2026 2026-04-11 7/350 2026-04-12 20:24 by qut2026
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 085506-求调剂-285分 +3 雷欧飞踢 2026-04-08 3/150 2026-04-11 08:37 by zhq0425
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550, 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 一志愿中南大学物理学,英一66,求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 本科西工大 0856 324求调剂 +10 wysyjs25 2026-04-09 11/550 2026-04-10 08:37 by 5268321
[考博] 博士自荐 +7 可可小胖 2026-04-08 7/350 2026-04-10 08:28 by kimhero
[考研] 初试分332,一志愿报考西北工业大学, +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
信息提示
请填处理意见