24小时热门版块排行榜    

查看: 863  |  回复: 6
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 lij2 的 3 个金币

lij2

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR

请教各位高手:我是以质粒序列设计的引物和探针,想测定粪便中该菌的量。但现在遇到一个难题:我用纯菌提的基因组DNA做PCR做不出来,用质粒能做出来。粪便细菌又只有基因DNA提取的方法。
基因组试剂盒是可以连质粒一起提出来的吧,可PCR却做不出来,该怎么办?有从粪便提质粒的方法吗?还是该怎么优化PCR条件?
请指教!!!多谢多谢~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)


★ ★
dhd997(金币+2):热心版版,good 2011-01-09 16:39:36
lij2(金币+1): 2011-01-11 13:14:12
是否该菌在正常条件下没有了该质粒了,而你又是用质粒设计的引物,建议你提取菌的基因组DNA,找出保守序列,设计引物,检测该菌的含量。
荧光定量PCR对引物要求很高,退火温度等可以在60度左右,尽量避免污染!
2楼2011-01-09 15:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genetics183

木虫 (正式写手)


lij2(金币+1): 2011-01-11 13:14:16
提基因组的试剂不能提质粒。
反之,亦然。
3楼2011-01-09 16:52:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-09 15:15:29:
是否该菌在正常条件下没有了该质粒了,而你又是用质粒设计的引物,建议你提取菌的基因组DNA,找出保守序列,设计引物,检测该菌的含量。
荧光定量PCR对引物要求很高,退火温度等可以在60度左右,尽量避免污染!

我是同一管菌,1ml提质粒,1ml提基因组DNA
基因组DNA设计不出特异的引物和探针,很苦恼啊
4楼2011-01-09 16:56:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by genetics183 at 2011-01-09 16:52:53:
提基因组的试剂不能提质粒。
反之,亦然。

提基因组DNA的试剂盒提出来的DNA包括了质粒吧
5楼2011-01-09 16:57:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)


继续求助
6楼2011-01-10 12:33:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)


顶一个
7楼2011-01-10 19:01:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lij2 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 刚刚收到科研之友邮件 +14 olivermiaoer 2024-06-19 18/900 2024-06-20 08:33 by olivermiaoer
[基金申请] 面青地会评时间??? +6 Axvdvbfs 2024-06-19 6/300 2024-06-20 08:31 by haishuixing2
[考博] 这个博士要读吗 +14 Sea Breeze 2024-06-16 23/1150 2024-06-20 05:41 by 投必得科研顾问
[海外博后] 墨尔本大学博后offer要不要接 +3 kyxblmm 2024-06-18 3/150 2024-06-19 22:39 by blake1111
[基金申请] 青年基金会评专家到底是怎么会评的呀?主审专家是不是一般不会改动系统按函评给的顺序 5+3 他山攻玉之石 2024-06-18 14/700 2024-06-19 19:43 by liliwang215
[论文投稿] 审稿人含糊拒稿,还需要回复吗?如何回复? 20+4 BruceChum 2024-06-15 22/1100 2024-06-19 08:00 by kanyechris
[找工作] 初始合伙人来啦!(生物试剂耗材标准品) +14 欢快的小科研人 2024-06-15 25/1250 2024-06-18 20:35 by 小飞来虫
[有机交流] 跑板能跑开,过柱过不纯怎么办 +4 小胡在努力 2024-06-18 6/300 2024-06-18 15:20 by long8811
[基金申请] 有人中过人文社科类的博后特助吗? +3 outsider1986 2024-06-16 5/250 2024-06-18 11:10 by 袁天未然
[硕博家园] 博士毕业高校和就业的相关问题 +7 SCITOPPP 2024-06-14 11/550 2024-06-18 07:51 by yinxing1995
[论文投稿] 论文已接收,但发现修改稿传的是旧版该怎么办? +3 zsq54321 2024-06-15 6/300 2024-06-17 19:45 by wjykycg
[教师之家] 每次骚扰女学生的都是院系领导,而不是普通教师,小编们要注意措辞正确 +9 zju2000 2024-06-15 11/550 2024-06-16 14:49 by appleapple2
[基金申请] 博后基金,博管会会提前知道消息吗? +4 yuyiang 2024-06-13 4/200 2024-06-16 11:40 by yangyuzhong4
[基金申请] 为什么我的博后基金还在流动站审核中?不会是学院给我卡了吧? +14 王凯12 2024-06-13 26/1300 2024-06-15 15:22 by 好人与坏人
[基金申请] 博后基金,以往的结果点不开,怎么回事呢?最后一次机会了,两次都没中前面。 +7 kyukitu 2024-06-14 13/650 2024-06-15 06:46 by 我是王小帅
[论文投稿] 投了一篇4区的SCI,审稿人一个拒稿,一个小修,编辑给了大修。 +9 安稳22123 2024-06-13 10/500 2024-06-14 23:45 by jurkat.1640
[基金申请] 博士后基金需要结题吗? +8 zhouchuck 2024-06-13 8/400 2024-06-14 17:27 by liuyupu132
[考博] 申博找导师 +4 疏影横斜水清浅3 2024-06-13 6/300 2024-06-14 14:31 by zxl_1105
[有机交流] ππ堆积会发生在有机溶剂中吗 5+3 zibuyu0420 2024-06-13 4/200 2024-06-14 14:17 by 小肉干
[基金申请] 国自然基金公布的时候基金号有吗 +8 潇洒怡惜 2024-06-13 11/550 2024-06-14 11:24 by JRfei
信息提示
请填处理意见