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荧光定量PCR cq非数字是什么原因
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求助 定量PCR cq非数字可能是什么原因呢？ 普通PCR内参和目的基因都可以跑出目的条带，一做定量就没有，请问这可能是哪方面原因导致的？ |
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王艳xinwei
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2楼2013-07-13 07:27:19
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王艳xinwei
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我们实验室是ABI7500，用的是Takara家的荧光试剂盒，反应体系：2×SYBR® Premix Ex TaqTM Ⅱ（Tli RNaseH Plus）10.0μL，50×ROX Reference DyeⅡ0.4 μL, 正反向引物 (10μmol·L−1) 各0.8μL, cDNA模板2.0μL，加水补足至20.0μL, 每个反应体系重复3次。 实时PCR扩增程序如下：94 ℃ 30 s; 94 ℃ 5 s, 58 ℃ 30 s, 72℃ 40 s, 40 个循环。 我估计是你的MIX有问题，荧光没有充分镶嵌。也有可能是你引物设计有问题，引物特异性怎么样，普通PCR电泳条带单一吗？ 希望对楼主有帮助 |
7楼2013-07-16 12:14:39
