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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 荧光定量PCR cq非数字是什么原因
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亚先

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR cq非数字是什么原因

求助 定量PCR cq非数字可能是什么原因呢？ 普通PCR内参和目的基因都可以跑出目的条带，一做定量就没有，请问这可能是哪方面原因导致的？
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说到做到这就是我的忍道
1楼 2013-07-12 21:26:31
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亚先

银虫 (小有名气)
扩增曲线
溶解曲线
反应程序
荧光定量PCR cq非数字是什么原因
Cq.jpg


荧光定量PCR cq非数字是什么原因-1
反应程序.jpg


荧光定量PCR cq非数字是什么原因-2
溶解.jpg
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说到做到这就是我的忍道
6楼2013-07-13 13:09:12
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王艳xinwei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
亚先: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-07-13 12:47:23
不知道你是应用那个程序，但一般没有数据的问题应该是你在设程序过程中，没有点击程序框里的暗图标，应该将循环程序中的最后一步下的图标点亮，这样系统就会接收数据，在最后分析中才会有曲线、峰值及结果。祝楼主顺利
赞一下(1人) 回复此楼
坚持就是胜利
2楼2013-07-13 07:27:19
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亚先

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王艳xinwei at 2013-07-13 07:27:19
不知道你是应用那个程序，但一般没有数据的问题应该是你在设程序过程中，没有点击程序框里的暗图标，应该将循环程序中的最后一步下的图标点亮，这样系统就会接收数据，在最后分析中才会有曲线、峰值及结果。祝楼主顺 ...

谢谢 我能看到曲线，但是第一个像一头被风吹得飘散的长发  溶解曲线则没有峰，像U形。
赞一下(1人) 回复此楼
说到做到这就是我的忍道
3楼2013-07-13 12:54:07
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亚先

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王艳xinwei at 2013-07-13 07:27:19
不知道你是应用那个程序，但一般没有数据的问题应该是你在设程序过程中，没有点击程序框里的暗图标，应该将循环程序中的最后一步下的图标点亮，这样系统就会接收数据，在最后分析中才会有曲线、峰值及结果。祝楼主顺 ...

我用的机器是Thermo 的PIKOREAL96，用的TOYOBO的THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix。约三个月前我还用同样的MIX做出结果过，（模板和引物不同）。
有没有可能是Mix出问题了？
定量PCR延伸的温度该如何确定呢？是和普通PCR的温度一样吗？
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说到做到这就是我的忍道
4楼2013-07-13 13:00:04
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