应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解：实时荧光定量PCR奇峰
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
191/2返回列表12下一页
查看: 2591  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

欧朵拉

铁虫 (小有名气)

[交流] 求解：实时荧光定量PCR奇峰 已有8人参与

求高人指点，最近在做定量PCR，阳性扩增曲线很好，可是阴性也有峰型。阴性Ct值在36以上，而且阳性和阴性Ct值相差很大，这样的结果怎么判定？
重复了好几次，阴性都是在36以后起峰，引物、模板都换了，依然是这个结果···
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做自己喜欢的事情，心态决定一切~
1楼 2012-06-20 09:11:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 斑斑很辛苦哈 2012-06-20 15:35:34
阴性的Ct值在35以上就可以认为没问题了。微弱的非特异结合（错配、二聚体等）在多个循环之后可能有一些扩增的，如果阴性对照在35个循环之后才出现的扩增，一般认为是正常的。楼主不放心的话，可以把阴性对照的产物拿去跑胶，没有特异条带的话就没问题了，当然，可能有弥散的带，那是非特异扩增的产物。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-06-20 15:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

l_h_10

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-20 15:34:56
你的阴性是没加什么？如果是加了引物，没加模版的话，有可能是引物污染了。（引物是在超净工作台里稀释的吗？）还有你用的是什么的试剂盒？如果是takara的试剂盒的话，也没有关系了，他们试剂盒的本底值比较高，我们也出现过这个问题，就咨询过技术员，takara的技术员说只要在35个循环之后出峰是没有问题的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-20 09:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiayongxiu

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-20 15:35:05
水也很重要，看看你的水是否有问题。还有就是你的阳性的溶解曲线如何？是单峰还是双峰？如果阳性没有任何问题，而NTC有扩增也是可以的，只要其ct值在35个循环之后。
赞一下 回复此楼
一切都要靠自己努力
3楼2012-06-20 11:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoyonggang

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我记得阴性阳性ct差7以上就可以忽略了，你的达到这个标准了吗？达到了就不要太纠结于阴性的峰了
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-20 12:44:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by l_h_10 at 2012-06-20 09:40:02
你的阴性是没加什么？如果是加了引物，没加模版的话，有可能是引物污染了。（引物是在超净工作台里稀释的吗？）还有你用的是什么的试剂盒？如果是takara的试剂盒的话，也没有关系了，他们试剂盒的本底值比较高，我们 ...

我的阴性对照加了引物，模板用去离子水代替。但是引物稀释没有在超净工作台稀释，这个影响大吗？我们用的是invitrogen试剂盒···
赞一下 回复此楼
做自己喜欢的事情，心态决定一切~
5楼2012-06-20 13:58:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiayongxiu at 2012-06-20 11:24:29
水也很重要，看看你的水是否有问题。还有就是你的阳性的溶解曲线如何？是单峰还是双峰？如果阳性没有任何问题，而NTC有扩增也是可以的，只要其ct值在35个循环之后。

水没有问题，阳性曲线单峰，而且峰型也很好看，NTC有扩增，可是根据标准，如果在35个循环后还是起峰就判定是阳性，这样明显有问题啊··········
赞一下 回复此楼
做自己喜欢的事情，心态决定一切~
6楼2012-06-20 14:00:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaoyonggang at 2012-06-20 12:44:38
我记得阴性阳性ct差7以上就可以忽略了，你的达到这个标准了吗？达到了就不要太纠结于阴性的峰了

达到了，那这样就可以判定是阴性了吗？求解···
而且其它的引物都没有问题，阴性很干净，不会出现峰型。
赞一下 回复此楼
做自己喜欢的事情，心态决定一切~
7楼2012-06-20 14:01:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l_h_10

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-21 13:38:57
这个影响我也说不准吧，反正我们做RT-PCR的话，所有东西都是在超净工作台里做的，目的就是问了避免有外源性DNA混入引物，引起扩增。
你可以打电话给invitrogen 技术人员，他们有的时候会有很好的建议的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-20 14:36:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoyonggang

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 欧朵拉 at 2012-06-20 14:01:51
达到了，那这样就可以判定是阴性了吗？求解···
而且其它的引物都没有问题，阴性很干净，不会出现峰型。...

超过7以上就意味着阴性是阳性的0.5%以下（假设你的引物扩增效率是2），已经很干净了。
赞一下 回复此楼
9楼2012-06-20 15:09:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 欧朵拉 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +12 呼呼？~+123456 2026-04-05 12/600 2026-04-05 14:15 by shanshui11
[考研] 一志愿9材料学硕297已过六级求调剂推荐 +10 adaie 2026-04-04 11/550 2026-04-05 12:28 by 418490947
[考研] 085410人工智能 初试316分 求调剂 +6 残星拂曙 2026-03-31 6/300 2026-04-05 12:15 by rainbow11
[考研] 本科211，293分请求调剂 +7 莲菜就是藕吧 2026-04-03 8/400 2026-04-05 11:41 by arrow8852
[考研] 312求调剂 +3 Say Never 2026-04-04 3/150 2026-04-05 11:19 by guoweigw
[有机交流] 甲醇/二氯 1:15过柱子 5+3 a哎y呦w喂 2026-03-31 3/150 2026-04-05 10:42 by 88817753
[考研] 一志愿西北农林畜牧专硕336分求调剂 +3 5ourr 2026-04-03 3/150 2026-04-05 10:40 by JOKER0401
[考研] 341求调剂 +3 学无止境，冲 2026-04-05 3/150 2026-04-05 09:40 by lbsjt
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 。 +5 雾与海 2026-04-02 6/300 2026-04-04 19:53 by 蓝云思雨
[考研] 321求调剂 +6 认真求上学 2026-04-03 6/300 2026-04-04 19:51 by dongzh2009
[考研] 一志愿沪985，326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +7 困困困困坤坤 2026-04-02 7/350 2026-04-03 17:26 by Yuena_Wang
[考研] 一志愿生物与医药，296分，求调剂 +8 66鹿 2026-04-03 9/450 2026-04-03 14:22 by 化学化工硕士招�
[硕博家园] 求老师收留 +9 lllq123 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:48 by 呼吸都是减肥
[考研] 318求调剂 +3 笃行致远. 2026-03-31 4/200 2026-04-02 15:56 by Jaylen.
[考研] 377求调剂 +3 RASKIN 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:45 by zzchen2000
[考研] 379求调剂 +3 ?苦瓜不苦 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:09 by 暮云清寒
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 16/800 2026-04-01 17:58 by 邱gl
[有机交流] 甲基亚磺磺酸钠和甲基磺酸酯反应机理 10+3 kaobao456 2026-03-29 4/200 2026-03-30 23:16 by nBu锂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭