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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

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[交流] 求解：实时荧光定量PCR奇峰已有8人参与

求高人指点，最近在做定量PCR，阳性扩增曲线很好，可是阴性也有峰型。阴性Ct值在36以上，而且阳性和阴性Ct值相差很大，这样的结果怎么判定？
重复了好几次，阴性都是在36以后起峰，引物、模板都换了，依然是这个结果···

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做自己喜欢的事情，心态决定一切~

1楼 2012-06-20 09:11:38

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zhaoyonggang

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 欧朵拉 at 2012-06-20 14:01:51
达到了，那这样就可以判定是阴性了吗？求解···
而且其它的引物都没有问题，阴性很干净，不会出现峰型。...

超过7以上就意味着阴性是阳性的0.5%以下（假设你的引物扩增效率是2），已经很干净了。

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9楼2012-06-20 15:09:24

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l_h_10

金虫 (小有名气)

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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-20 15:34:56

你的阴性是没加什么？如果是加了引物，没加模版的话，有可能是引物污染了。（引物是在超净工作台里稀释的吗？）还有你用的是什么的试剂盒？如果是takara的试剂盒的话，也没有关系了，他们试剂盒的本底值比较高，我们也出现过这个问题，就咨询过技术员，takara的技术员说只要在35个循环之后出峰是没有问题的。

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2楼2012-06-20 09:40:02

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