24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
查看: 2332  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

欧朵拉

铁虫 (小有名气)

[交流] 求解:实时荧光定量PCR奇峰已有8人参与

求高人指点,最近在做定量PCR,阳性扩增曲线很好,可是阴性也有峰型。阴性Ct值在36以上,而且阳性和阴性Ct值相差很大,这样的结果怎么判定?
重复了好几次,阴性都是在36以后起峰,引物、模板都换了,依然是这个结果···
回复此楼
做自己喜欢的事情,心态决定一切~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoyonggang

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我记得阴性阳性ct差7以上就可以忽略了,你的达到这个标准了吗?达到了就不要太纠结于阴性的峰了
4楼2012-06-20 12:44:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

l_h_10

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-20 15:34:56
你的阴性是没加什么?如果是加了引物,没加模版的话,有可能是引物污染了。(引物是在超净工作台里稀释的吗?)还有你用的是什么的试剂盒?如果是takara的试剂盒的话,也没有关系了,他们试剂盒的本底值比较高,我们也出现过这个问题,就咨询过技术员,takara的技术员说只要在35个循环之后出峰是没有问题的。
2楼2012-06-20 09:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiayongxiu

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-20 15:35:05
水也很重要,看看你的水是否有问题。还有就是你的阳性的溶解曲线如何?是单峰还是双峰?如果阳性没有任何问题,而NTC有扩增也是可以的,只要其ct值在35个循环之后。
一切都要靠自己努力
3楼2012-06-20 11:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧朵拉

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by l_h_10 at 2012-06-20 09:40:02
你的阴性是没加什么?如果是加了引物,没加模版的话,有可能是引物污染了。(引物是在超净工作台里稀释的吗?)还有你用的是什么的试剂盒?如果是takara的试剂盒的话,也没有关系了,他们试剂盒的本底值比较高,我们 ...

我的阴性对照加了引物,模板用去离子水代替。但是引物稀释没有在超净工作台稀释,这个影响大吗?我们用的是invitrogen试剂盒···
做自己喜欢的事情,心态决定一切~
5楼2012-06-20 13:58:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见