应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解：实时荧光定量PCR奇峰
191/2返回列表12下一页
查看: 2973  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

欧朵拉

铁虫 (小有名气)

[交流] 求解：实时荧光定量PCR奇峰 已有8人参与

求高人指点，最近在做定量PCR，阳性扩增曲线很好，可是阴性也有峰型。阴性Ct值在36以上，而且阳性和阴性Ct值相差很大，这样的结果怎么判定？
重复了好几次，阴性都是在36以后起峰，引物、模板都换了，依然是这个结果···
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做自己喜欢的事情，心态决定一切~
1楼 2012-06-20 09:11:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 斑斑很辛苦哈 2012-06-20 15:35:34
阴性的Ct值在35以上就可以认为没问题了。微弱的非特异结合（错配、二聚体等）在多个循环之后可能有一些扩增的，如果阴性对照在35个循环之后才出现的扩增，一般认为是正常的。楼主不放心的话，可以把阴性对照的产物拿去跑胶，没有特异条带的话就没问题了，当然，可能有弥散的带，那是非特异扩增的产物。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-06-20 15:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

l_h_10

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-20 15:34:56
你的阴性是没加什么？如果是加了引物，没加模版的话，有可能是引物污染了。（引物是在超净工作台里稀释的吗？）还有你用的是什么的试剂盒？如果是takara的试剂盒的话，也没有关系了，他们试剂盒的本底值比较高，我们也出现过这个问题，就咨询过技术员，takara的技术员说只要在35个循环之后出峰是没有问题的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-20 09:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiayongxiu

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-20 15:35:05
水也很重要，看看你的水是否有问题。还有就是你的阳性的溶解曲线如何？是单峰还是双峰？如果阳性没有任何问题，而NTC有扩增也是可以的，只要其ct值在35个循环之后。
赞一下 回复此楼
一切都要靠自己努力
3楼2012-06-20 11:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoyonggang

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我记得阴性阳性ct差7以上就可以忽略了，你的达到这个标准了吗？达到了就不要太纠结于阴性的峰了
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-20 12:44:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by l_h_10 at 2012-06-20 09:40:02
你的阴性是没加什么？如果是加了引物，没加模版的话，有可能是引物污染了。（引物是在超净工作台里稀释的吗？）还有你用的是什么的试剂盒？如果是takara的试剂盒的话，也没有关系了，他们试剂盒的本底值比较高，我们 ...

我的阴性对照加了引物，模板用去离子水代替。但是引物稀释没有在超净工作台稀释，这个影响大吗？我们用的是invitrogen试剂盒···
赞一下 回复此楼
做自己喜欢的事情，心态决定一切~
5楼2012-06-20 13:58:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiayongxiu at 2012-06-20 11:24:29
水也很重要，看看你的水是否有问题。还有就是你的阳性的溶解曲线如何？是单峰还是双峰？如果阳性没有任何问题，而NTC有扩增也是可以的，只要其ct值在35个循环之后。

水没有问题，阳性曲线单峰，而且峰型也很好看，NTC有扩增，可是根据标准，如果在35个循环后还是起峰就判定是阳性，这样明显有问题啊··········
赞一下 回复此楼
做自己喜欢的事情，心态决定一切~
6楼2012-06-20 14:00:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaoyonggang at 2012-06-20 12:44:38
我记得阴性阳性ct差7以上就可以忽略了，你的达到这个标准了吗？达到了就不要太纠结于阴性的峰了

达到了，那这样就可以判定是阴性了吗？求解···
而且其它的引物都没有问题，阴性很干净，不会出现峰型。
赞一下 回复此楼
做自己喜欢的事情，心态决定一切~
7楼2012-06-20 14:01:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l_h_10

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-21 13:38:57
这个影响我也说不准吧，反正我们做RT-PCR的话，所有东西都是在超净工作台里做的，目的就是问了避免有外源性DNA混入引物，引起扩增。
你可以打电话给invitrogen 技术人员，他们有的时候会有很好的建议的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-20 14:36:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoyonggang

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 欧朵拉 at 2012-06-20 14:01:51
达到了，那这样就可以判定是阴性了吗？求解···
而且其它的引物都没有问题，阴性很干净，不会出现峰型。...

超过7以上就意味着阴性是阳性的0.5%以下（假设你的引物扩增效率是2），已经很干净了。
赞一下 回复此楼
9楼2012-06-20 15:09:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 欧朵拉 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +17 angus9576 2026-08-25 21/1050 2026-08-25 22:39 by 悠悠美女
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭