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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解：实时荧光定量PCR奇峰
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-06-20 15:31:32
阴性的Ct值在35以上就可以认为没问题了。微弱的非特异结合（错配、二聚体等）在多个循环之后可能有一些扩增的，如果阴性对照在35个循环之后才出现的扩增，一般认为是正常的。楼主不放心的话，可以把阴性对照的产物拿 ...

好的~非常感谢~
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做自己喜欢的事情，心态决定一切~
11楼2012-06-20 16:10:20
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
ct32 以上就可以无视了。。。
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12楼2012-06-21 10:36:35
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thy1987110

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-22 13:36:09
这个得看你的峰形是不是S线，如果不是的话基本可以忽略。你可以看看溶解曲线怎样，如果与阳性的峰不是在同一水平位出现的话那就证明是非特异扩增了。扩增后期是会出现非特异性扩增的，完全不影响你的实验。如果实在是不放心就拿去跑胶检测一下咯，这样一看就明了了。希望有帮助！
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13楼2012-06-22 04:32:29
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xiayongxiu

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-22 13:36:19
引用回帖:
6楼: Originally posted by 欧朵拉 at 2012-06-20 14:00:31
水没有问题，阳性曲线单峰，而且峰型也很好看，NTC有扩增，可是根据标准，如果在35个循环后还是起峰就判定是阳性，这样明显有问题啊··········...

引物有扩增很正常，可能是引物二聚体，在严格意义上是要重新设计引物的，不过你的阳性很好，单峰，说明引物对于你的目的基因是可以的啊。如果你要弄清楚NTC的扩增是什么，可以拿去测序。一般好的文章，做QPCR，结果都是要拿去测序的。
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一切都要靠自己努力
14楼2012-06-22 10:20:50
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孙启亮

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以忽略不计，PCR是很敏感的，有时候你就是用水，也会跑出曲线来。但出现这种情况的原因很难解释。如果楼主用内参的引物做NTC，结果很可能跑出曲线来，但是由于CT值相差很大，所以不影响定量的，楼主可放心
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15楼2012-06-22 16:50:49
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by xiayongxiu at 2012-06-22 10:20:50
引物有扩增很正常，可能是引物二聚体，在严格意义上是要重新设计引物的，不过你的阳性很好，单峰，说明引物对于你的目的基因是可以的啊。如果你要弄清楚NTC的扩增是什么，可以拿去测序。一般好的文章，做QPCR，结果 ...

好的，非常感谢~
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16楼2012-06-25 15:57:23
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by thy1987110 at 2012-06-22 04:32:29
这个得看你的峰形是不是S线，如果不是的话基本可以忽略。你可以看看溶解曲线怎样，如果与阳性的峰不是在同一水平位出现的话那就证明是非特异扩增了。扩增后期是会出现非特异性扩增的，完全不影响你的实验。如果实在 ...

我用的是探针法
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17楼2012-06-25 15:57:46
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-06-22 16:50:49
可以忽略不计，PCR是很敏感的，有时候你就是用水，也会跑出曲线来。但出现这种情况的原因很难解释。如果楼主用内参的引物做NTC，结果很可能跑出曲线来，但是由于CT值相差很大，所以不影响定量的，楼主可放心

快奔溃了，找不到原因····虽然阳性很好，可是阴性出现曲线，这图太难看了···
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18楼2012-06-25 15:59:12
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
15楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-06-22 16:50:49
可以忽略不计，PCR是很敏感的，有时候你就是用水，也会跑出曲线来。但出现这种情况的原因很难解释。如果楼主用内参的引物做NTC，结果很可能跑出曲线来，但是由于CT值相差很大，所以不影响定量的，楼主可放心

弱弱的问句，啥叫NTC，为啥要做一组NTC实验
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啊
19楼2015-07-30 16:58:25
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