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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

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专业: 生物化学

[交流] 求解：实时荧光定量PCR奇峰已有8人参与

求高人指点，最近在做定量PCR，阳性扩增曲线很好，可是阴性也有峰型。阴性Ct值在36以上，而且阳性和阴性Ct值相差很大，这样的结果怎么判定？
重复了好几次，阴性都是在36以后起峰，引物、模板都换了，依然是这个结果···

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做自己喜欢的事情，心态决定一切~

1楼 2012-06-20 09:11:38

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欧朵拉

铁虫 (小有名气)

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引用回帖:

13楼: Originally posted by thy1987110 at 2012-06-22 04:32:29
这个得看你的峰形是不是S线，如果不是的话基本可以忽略。你可以看看溶解曲线怎样，如果与阳性的峰不是在同一水平位出现的话那就证明是非特异扩增了。扩增后期是会出现非特异性扩增的，完全不影响你的实验。如果实在 ...

我用的是探针法

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做自己喜欢的事情，心态决定一切~

17楼2012-06-25 15:57:46

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l_h_10

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-20 15:34:56

你的阴性是没加什么？如果是加了引物，没加模版的话，有可能是引物污染了。（引物是在超净工作台里稀释的吗？）还有你用的是什么的试剂盒？如果是takara的试剂盒的话，也没有关系了，他们试剂盒的本底值比较高，我们也出现过这个问题，就咨询过技术员，takara的技术员说只要在35个循环之后出峰是没有问题的。