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好好后生

金虫 (初入文坛)

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[求助] 荧光定量Pcr问题求助已有1人参与

我做了荧光定量pcr ，采用delta delta CT 法，需要用两板，有内参β-actin ，还有目的基因clock，定量仪器的阈值是自动生成的 1在同一板上，仪器生成两条阈值，分别是所有不同样的内参基因的阈值和所有不同样clock基因的阈值，这两个阈值线为什么不在同一条水平线上，会影响结果吗 2 在另一个板上，也是内参基因β-actin和所有不同样clock基因，阈值也是不同的，如果我要比较这两板的目的基因的clock相对水平，阈值线需要重调吗，怎么调合适，因为我发现在两板上仪器自动生成的阈值线是有差异的，并且如果有一个空跑的不好，阈值线会发生比较大的变化

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1楼 2014-05-31 09:15:32

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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 好好后生 at 2014-05-31 13:56:29
因为目的基因需要分两板做，那请问两批PCR阈值怎么设定，任然根据软件自动生成似乎不对，比方说有一个内参基因的孔出错了，平台期很低，导致全部的内参基因阈值都压低了，这好像需要手动调整，这样怎么调整才能保持 ...

手动设定

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4楼2014-05-31 14:24:55

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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
好好后生(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-31 15:30:03
好好后生: 金币+50, ★有帮助, 虽然没解决问题，还是感谢 2014-06-04 11:09:21

只要同一批PCR中同种基因的样品阈值相同就行