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好好后生

金虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量Pcr问题求助 已有1人参与

我做了荧光定量pcr ,采用delta delta CT 法,需要用两板,有内参β-actin ,还有目的基因clock,定量仪器的阈值是自动生成的  1在同一板上,仪器生成两条阈值,分别是所有不同样的内参基因的阈值和所有不同样clock基因的阈值,这两个阈值线为什么不在同一条水平线上,会影响结果吗 2 在另一个板上,也是内参基因β-actin和所有不同样clock基因,阈值也是不同的,如果我要比较这两板的目的基因的clock相对水平,阈值线需要重调吗,怎么调合适,因为我发现在两板上仪器自动生成的阈值线是有差异的,并且如果有一个空跑的不好,阈值线会发生比较大的变化
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好好后生

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-31 12:18:43
只要同一批PCR中同种基因的样品阈值相同就行

因为目的基因需要分两板做,那请问两批PCR阈值怎么设定,任然根据软件自动生成似乎不对,比方说有一个内参基因的孔出错了,平台期很低,导致全部的内参基因阈值都压低了,这好像需要手动调整,这样怎么调整才能保持两板之间的误差减少
3楼2014-05-31 13:56:29
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
好好后生(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-31 15:30:03
好好后生: 金币+50, 有帮助, 虽然没解决问题,还是感谢 2014-06-04 11:09:21
只要同一批PCR中同种基因的样品阈值相同就行
2楼2014-05-31 12:18:43
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 好好后生 at 2014-05-31 13:56:29
因为目的基因需要分两板做,那请问两批PCR阈值怎么设定,任然根据软件自动生成似乎不对,比方说有一个内参基因的孔出错了,平台期很低,导致全部的内参基因阈值都压低了,这好像需要手动调整,这样怎么调整才能保持 ...

手动设定
4楼2014-05-31 14:24:55
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好好后生

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-31 14:24:55
手动设定...

请问两板之间的阈值怎么设定才能误差比较小,我知道同一批次的荧光定量目的基因和内参基因的阈值可以不一样,但是两板之间,我是否需要把目的基因和内参基因阈值调成同一水平,这两板的结果才能比较?
5楼2014-05-31 15:27:52
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