应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题
61/1返回列表
查看: 1931  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sejorn

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题 已有4人参与

本人用Taqman的荧光定量PCR方法测细菌总量，使用的探针是Takara公司合成的，PCR反应体系采用上海生工的taqman试剂盒。使用的标准质粒的浓度范围为：4.9*10~4.9*107copies/ul，做出来的标准曲线效果很差，荧光信号比较弱，曲线很乱。请教高手，是什么原因造成的呢？不知怎改进……谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-12-22 15:45:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-22 23:15:49
这个都没有典型的扩增曲线，看在component图形有没有扩增
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-22 16:06:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biolinkphila

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-22 23:15:55
efficency 太高了，是不是非特异性扩增啊，一般应该在0.9~1.05比较好吧，|R|>99%，线性才算好。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-12-22 16:30:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sejorn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by biolinkphila at 2010-12-22 16:30:58:
efficency 太高了，是不是非特异性扩增啊，一般应该在0.9~1.05比较好吧，|R|>99%，线性才算好。

你好！我是第一次做这个，对定量PCR的了解还很浅。efficency太高，可能是哪些原因造成的呢？定量PCR的非特异性扩增，可以从哪些方面进行改进呢？谢谢啊！我采用的反应条件是Taqman试剂盒里的条件，94度 4min，接着40cyclers(94度30秒,60度60秒)。
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-22 20:54:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sejorn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2010-12-22 16:06:22:
这个都没有典型的扩增曲线，看在component图形有没有扩增

你好！我是初次接解这个PCR实验，弱弱的问一句，“component图形”是什么呢？我也感觉没有那种从上升到保持不变的典型扩增曲线。但都不知是什么原因，不知道从哪里下手，作改进？谢谢啊！
赞一下 回复此楼
5楼2010-12-22 21:02:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fangjun1986

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by sejorn at 2010-12-22 21:02:24:


你好！我是初次接解这个PCR实验，弱弱的问一句，“component图形”是什么呢？我也感觉没有那种从上升到保持不变的典型扩增曲线。但都不知是什么原因，不知道从哪里下手，作改进？谢谢啊！

component图形，就在你看结果的那个窗口里，你打开看看就可以了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-01-05 14:31:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sejorn 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:40 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:31 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 21/1050 2026-11-06 01:29 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 01:29 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 01:20 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-05 23:28 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-05 23:28 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 23:19 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-05 22:57 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 9/450 2026-11-05 22:55 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 13/650 2026-11-05 22:55 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-05 22:44 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 3/150 2026-11-05 21:05 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 20:43 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:43 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:23 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 11/550 2026-11-05 20:21 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:21 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:00 by My20PsvIExYO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭