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新手做荧光定量PCR几个疑问求解答！！已有4人参与
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1.绝对定量标曲一般是做克隆通过重组质粒构建起来，但有的文献标准品直接用普通PCR产物纯化后来做成标曲，后者方法简单但是不是有什么缺陷啊？？没做过克隆的想偷懒用后面的方法做标曲啊！！求指点。 2.标准品拷贝数是根据浓度计算出来的对吧？这个浓度要用什么仪器测呢？ 3.如果做相对定量，细菌的内参基因（管家基因？持家基因？）一般用什么啊，跟绝对定量相比两者哪个更方便或更可信？ PS：本人实验目的是看不同时期基因表达量，我觉得两种方法都能满足需求，求指点！  |
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梦梦神(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:22:27
梦梦神(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:22:27
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绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目，即通常所说的拷贝数。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例，而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。举例来说，如果研究项目中包括处理过的和未经处理的对照样本，通常可以将未经处理的样本指定为基准，规定其目的基因浓度为 100%，将经处理的样本的定量结果除以对照样品的定量结果，就可以计算各个处理样本的基因含量相对于未处理样品的百分比。 PS：你是要做细菌的某种基因的表达量，那就选择细菌的基因做内参，比如16S,要是做细菌处理后宿主的话，那就看宿主的内参，文献都有的，自己看 |
7楼2014-05-19 15:33:29
2楼2014-05-18 11:37:32
3楼2014-05-18 22:53:22
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
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谢谢谢谢！9楼2014-05-22 13:14:27
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