24小时热门版块排行榜    

查看: 3010  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

梦梦神

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手做荧光定量PCR几个疑问求解答!! 已有4人参与

1.绝对定量标曲一般是做克隆通过重组质粒构建起来,但有的文献标准品直接用普通PCR产物纯化后来做成标曲,后者方法简单但是不是有什么缺陷啊??没做过克隆的想偷懒用后面的方法做标曲啊!!求指点。
2.标准品拷贝数是根据浓度计算出来的对吧?这个浓度要用什么仪器测呢?
3.如果做相对定量,细菌的内参基因(管家基因?持家基因?)一般用什么啊,跟绝对定量相比两者哪个更方便或更可信?
PS:本人实验目的是看不同时期基因表达量,我觉得两种方法都能满足需求,求指点!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江心汀

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
梦梦神(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:22:01
为正确性,现在都流行将多设几个内参做个实验,比如actin,tublin,GAPDH,都是传统的持家基因,你可以看看相关文献
6楼2014-05-19 09:53:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-19 00:05:07
梦梦神: 金币+5 2014-05-22 13:21:05
ΔΔct法 相对定量就行了啦,前提是保证引物的扩增效率,一般直接从文献里面拿,验证好了就可以用了
ControlMyself
2楼2014-05-18 11:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦梦神

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2014-05-18 11:37:32
ΔΔct法 相对定量就行了啦,前提是保证引物的扩增效率,一般直接从文献里面拿,验证好了就可以用了

相对定量不知道该用哪个内参,很多文献都做的绝对定量,然后相对定量的也没提内参,求指点!
3楼2014-05-18 22:53:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
通过OD280测DNA浓度,单位μg或ng
4楼2014-05-19 09:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
信息提示
请填处理意见