24小时热门版块排行榜    

查看: 4228  |  回复: 21

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)


[交流] 荧光定量PCR用10ul反应成吗?

荧光定量PCR有人用过10ul反应吗?会不会太少了呀,我担心蒸发干了,有人用过10ul反应吗?多谢了。手机没法悬赏金币,电脑上的时候追加悬赏金币。


另外,这是我今天刚做的10ul体系的结果,不行啊,不知道是体系的问题还是试剂的问题呀我的cDNA和酶都只冻融过一次,在4℃融化之后用的,在冰上配制的混合液,在冰上加的样。大侠帮忙分析是哪儿的原因啊!


[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by zhang8826857 on 2012-7-19 at 15:20 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hxsm

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-19 15:21:31
zhang8826857: 金币+5, 谢谢 2012-09-21 16:24:54
曾经大规模数据都是用10的,没有一点问题,但是有时候也要看仪器和你的耗材,我整个流程几乎都是进口耗材,包括RNA的很多都是进口耗材,速度很快,这样的我5的体系也用过,其实没有什么问题的。。。移液枪,我是采用了一套全新的移液枪,用于整个实验流程。。。
14楼2012-07-19 08:56:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

love_st

金虫 (著名写手)


应该问题不大
2楼2012-07-18 08:37:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+5, 谢谢 2012-09-21 16:25:02
做过15的,10的没做过,感觉太少了吧,会不会加样误差大啊
3楼2012-07-18 17:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+2, 谢谢 2012-09-21 16:25:13
没问题,我以前做过。要用把好一点的移液枪,保证加样准确。
4楼2012-07-18 17:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Rick001

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+2, 谢谢 2012-09-21 16:25:19
太少了应该会影响复孔之间的差距以及重现性。
5楼2012-07-18 18:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenye.judy

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+5, 谢谢 2012-09-21 16:25:26
你的PCR管子和仪器只要配套,就没问题,我做过!
6楼2012-07-18 19:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我觉得pcr的体系最好还是20ul的体系最好,误差较小,你这么做事为了节约试剂吗?没有必要的,实验结果最重要。
9楼2012-07-18 22:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

328533973

金虫 (正式写手)


有点少了,一般20以上
10楼2012-07-18 22:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bus1010

铁虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+5, 谢谢 2012-09-21 16:25:43
我们室用的12.5ul反应体积。10ul体系+2.5模板,与25ul(20+5)比对过,没问题
12楼2012-07-19 00:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

webmasterone752

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 谢谢 2012-09-21 16:25:49
我做的是15的,没问题。
实验室也有人做10的,保证加样准确就没问题。
13楼2012-07-19 08:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhcosa

金虫 (小有名气)


做过对比,木有问题~
15楼2012-07-19 13:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbwalkman

木虫 (小有名气)


应该还好,别太少了吧
16楼2012-07-19 14:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanzongwei

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

17楼2012-07-19 14:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cll881125

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们做的荧光PCR都是20以上的,做过25、30、40、50,但是没做过10的体系,25的体系跑完后还可以测序的。
18楼2012-07-19 15:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 谢谢 2012-09-21 16:26:07
我们这边都是用10uL的。我最早用20uL,后来看旁边几家课题组都是10uL,也换成10uL的了。耗材方面,我们的是AB的机器没办法只能用原厂耗材,其他实验室都用Axygen的耗材。
19楼2012-07-19 15:46:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我常用的体系是这样的(Takara的试剂盒):

SYBR Premix Ex Taq (2X)        5 μL
Primer 1 (2 μM)                       1 μL
Primer 2 (2 μM)                       1 μL
cDNA (相当于50 ng RNA)      1 μL
水                                            2 μL
---------------------------------------------------------
Total                                      10 μL

我们普通PCR时引物是10 μM的,为了使体积不至于太小,做定量PCR的引物我就用2 μM的了。cDNA的用量可根据需要再调整。
另外,ROX是事先加入整管SYBR Premix Ex Taq里面的,体积很小就忽略了。

[ Last edited by 西瓜 on 2012-7-19 at 16:07 ]
20楼2012-07-19 16:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

austin2008

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 谢谢 2012-09-21 16:26:26
用ABI的机器,384孔板做10 uL体系很好的,没啥问题,注意实验的细节,贴膜之后挥发性的问题影响很小
21楼2012-07-20 08:38:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 谢谢 2012-09-21 16:26:37
不会,本人曾经试过10微升体系,没有问题,依然稳定
22楼2012-07-20 11:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
郑克宁7楼
2012-07-18 20:06   回复  
2012-07-18 20:39   回复  
2012-07-18 22:53   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhang8826857 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-18 8/400 2026-03-20 12:12 by 学员8dgXkO
[考研] 290求调剂 +4 ^O^乜 2026-03-19 4/200 2026-03-20 11:51 by 学员8dgXkO
[考研] 317求调剂 +4 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 11:08 by 申子申申
[考研] 265求调剂 +6 梁梁校校 2026-03-17 6/300 2026-03-20 08:59 by ZHANG0tao
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +3 Charlieyq 2026-03-19 3/150 2026-03-20 08:53 by xingguangj
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 0703化学调剂 +10 妮妮ninicgb 2026-03-15 14/700 2026-03-19 22:59 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +3 llllkkkhh 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:22 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
信息提示
请填处理意见